【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，尤其是涉及一种髓过氧化物酶结合蛋白、制备方法和应用。
技术介绍
1、髓过氧化物酶(myeloperoxidase，mpo)，是一种血红素蛋白酶，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中。外界刺激可导致中性粒细胞聚集，从而释放髓过氧化物酶。mpo的相对分子量为150kda，是由两个亚单位通过共价结合形成的四聚体，每个亚单位又有一条重链α(相对分子量60kda)和一条轻链β链(相对分子量为15kda)构成。
2、mpo可以通过催化氧化氯离子产生次氯酸在吞噬细胞内杀灭微生物，破坏多种靶物质，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。更重要的是，其氧化修饰低密度脂蛋白(ldl)可引起动脉粥样硬化，因此mpo被认为与心血管疾病的发生有关。
3、目前，mpo被认为是最有前景的心血管标志物，体内mpo含量升高预示着有动脉硬化以及冠心病的风险，是心肌梗死的早期预警，比其他指标如肌钙蛋白t、ck-mb以及crp更灵敏，更早地诊断和危险评估。
4、另外，目前常见的检测试剂盒中抗mpo抗体多为人阳性血清，但血清来源困难，且批次间差异较大；另外有杂交瘤技术生产的兔或鼠单抗；以及免疫动物阳性血清中纯化多抗，再偶联人igg，操作复杂，耗时久，成本较高。
5、因此开发出获取简单，可规模化生产，广泛应用，尤其是可用于临床检测试剂盒中的高亲和力的抗mpo的重组单抗，有着重要意义和价值。
6、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路b>
1、本专利技术的目的在于提供髓过氧化物酶结合蛋白，该结合蛋白与髓过氧化物酶具有良好的特异性结合能力。基于本专利技术提供的髓过氧化物酶结合蛋白，本专利技术的目的还在于提供其应用。本专利技术的另一目的在于以操作更简单的方法开发结合活性好的髓过氧化物酶结合蛋白，可用于髓过氧化物酶抗原的鉴定，以及辅助进行心血管疾病的诊断检测。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、名词定义：
4、在本文中“结合蛋白”此技术术语是指结合特定抗原的蛋白，其泛指包含互补决定区(cdr区)的一切蛋白及蛋白片段。蛋白及蛋白片段可以为抗体，“抗体”特别指全长抗体。“抗体”和“全长抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。非天然发生的抗体在本文中也被称为“重组抗体”，“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。
5、蛋白及蛋白片段也可以是包含抗体cdr的一部分或全部的抗原结合片段，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性，因为其结合至靶抗原，且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。此类片段选自但不限于f(ab’)2、fab’、fab、fv(由vh和vl构成)，scfv(单链抗体，vh和vl之间由一连接肽连接而成)、dsfv(二硫键稳定性fv抗体(disulfide stabilized fv fragments,dsfv))、双特异抗体、纳米抗体和抗体最小识别单位中的任意一种。除上述功能片段外，还包括半衰期已增加的任何片段。
6、结合蛋白的“可变区(variable region)”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端识别并结合抗原的结构域，该区段氨基酸的组成和排列决定了抗体识别抗原的特异性。重链可变结构域可以被称为“vh”。轻链的可变结构域可以被称为“vl”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。重链和轻链的可变区各自通过4个骨架区(framework region，fr)连接的3个互补性决定区(complementarity-determiningregion，cdr)(也被称作高变区)组成。骨架区和cdr的范围已被精确定义，例如在kabat(参见《免疫重要的蛋白质的序列》((sequences of proteins of immunological interest)，e.kabat等)和chothia中，本领域众所周知的任何cdr确定方法，包括方法的组合，可以鉴别可变结构域的cdr。每个链中的cdr通过fr保持紧密靠在一起构成可变区，通常情况下，重链和轻链的可变区vl/vh可由以下编号的cdr与fr按如下组合排列连接获得：fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4。
7、术语抗体的“恒定区”或“恒定结构域”表示单独的或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。抗体的重链具有一个可变结构域(vh)，继之以许多恒定结构域或区域，例如铰链、ch1、ch2、ch3和ch4中的一个或多个，ch1结构域邻近vh结构域且在抗体重链的铰链区的氨基端，且不形成抗体的fc区的部分；铰链区包括将ch1结构域连接至ch2结构域的重链分子的部分；ch2的n端通常为ch3结构域，ch3结构域通常形成抗体的c-端部分，在一些抗体类型中，例如igm和ige中恒定区还包括ch4结构域。抗体的恒定区可以源自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige和igd，以及它们的亚类和突变形式的恒定区。
8、本专利技术不限制髓过氧化物酶结合蛋白的获得方式。在一些可选的实施方式中，利用编码髓过氧化物酶结合蛋白的多核苷酸与载体连接后，在细胞表达能够获得相应抗体。可以将上述载体导入到真核细胞、尤其是哺乳动物细胞中，构建获得能够表达所述髓过氧化物酶结合蛋白。在另一些可选的实施方式中，结合蛋白还可以通过本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过肽合成，如自动肽合成仪获得(例如applied biosystems等销售的自动肽合成仪)；抗原结合片段还可选地通过抗原结合分子(包括完整抗体)的酶裂解产生，例如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶裂解；或化学裂解产生，例如通过化学还原分裂二硫键的方法获得上述的抗原结合片段。
9、术语“特异性识别”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”或其类似表述是指结合蛋白对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，结合蛋白以大约小于10-5m，例如大约小于10-5m、10-6m、10-7m、10-8m、10-9m或10-10m或更小的kd值结合。使用本领域中充分确立的方法可以确定抗体的kd值。用于评价配体诸如抗体对靶标的结合能力的其它标准测定是本领域已知的，包括例如，elisa、蛋白质印迹、ria和流式细胞计量术分析。
10、本文中术语“多核苷酸”指的是任何长度的核苷酸的聚合物形式，多核苷酸包括核糖核苷酸和/或脱氧核糖核苷酸。多核苷酸的实例包括但不限于单链、双链或多链dna或rna、基因组dna、cdna、dna-rna杂合体或者包含嘌呤和嘧啶碱基或其他天然、化学或生化修饰、非天然或衍生的核苷酸碱基的聚合物。多核苷酸编码上述mpo结合蛋白，编码可选地为编码正义链本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，包含轻链可变区和重链可变区；
2.根据权利要求1所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，所述髓过氧化物酶结合蛋白的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
3.根据权利要求1或2所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，所述髓过氧化物酶结合蛋白为完整抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种；
4.根据权利要求1或2所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，还包含恒定区；
5.根据权利要求4所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，所述髓过氧化物酶结合蛋白为人鼠嵌合抗体；
6.生物材料，其特征在于，包括多核苷酸、载体或细胞；
7.髓过氧化物酶结合蛋白的制备方法，其特征在于，包括培养如权利要求6中所述的细胞；
8.权利要求1～5任一项所述的髓过氧化物酶结合蛋白、或权利要求6所述的生物材料在如下(a)～(d)中任意一种的应用；
9.试剂
10.试剂盒，其特征在于，包含权利要求9所述的试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，包含轻链可变区和重链可变区；
2.根据权利要求1所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，所述髓过氧化物酶结合蛋白的重链可变区氨基酸序列如seq id no.6所示，轻链可变区氨基酸序列如seq id no.7所示。
3.根据权利要求1或2所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，所述髓过氧化物酶结合蛋白为完整抗体、f(ab’)2、fab’、fab、fv、scfv、dsfv、双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种；
4.根据权利要求1或2所述的髓过氧化物酶结合蛋白，其特征在于，还包含恒定区；
5...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓晴，徐亮，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽禾医疗诊断产品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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