【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于荧光免疫检测，具体涉及一种二维可调孔板样品支架及其在检测前列腺抗原中的应用。
技术介绍
1、前列腺癌是男性最常见的癌症之一，早期发现对患者的治疗和术后检测至关重要。然而，前列腺癌细胞的数量在早期阶段较少，因此在前期检测中难以检测。目前，临床上常用的前列腺癌筛查和诊断方法主要包括直肠前列腺超声、前列腺特异性抗原检测、多参数磁共振扫描等影像学检查。传统的前列腺抗原检测方法存在着特异性差、高假阳性率以及误诊的风险，这给前列腺癌的准确诊断和治疗带来了一定的挑战。
2、荧光检测是免疫检测的一种常用方法，其关键在于构建合适的荧光探针。荧光纳米材料以荧光强度高、抗光漂白的优点成为了医学领域热门的光学检测手段。其中，上转换纳米发光材料（ucnp）可以将低频光子转化为高频光子，通常是近红外光激发，可见光发射。而生物样本的自发荧光通常在紫外光激发下产生。因此，相较于传统的有机荧光染料和量子点，稀土掺杂的上转换荧光纳米材料近红外光激发、可见光发射的性能有效降低组织对光的吸收和散射，因此具有高信噪比、组织穿透深度大、无背景噪音干扰以及对生物组织几乎无损伤等优点。将上转换纳米材料作为荧光探针可提高检测灵敏度，从而提高前列腺癌检测的准确性。
3、上转换免疫吸附测定是以上转换纳米材料的光致发光为基础，原理同酶联免疫法，区别是酶联免疫法通过酶的催化作用，把待检测物质浓度转化为酶促反应的反应物或产物变量来检测。而上转换连接免疫吸附测定是用上转换材料替代了酶，利用捕获分子固定在基质上去结合反应物分子标记的上转换纳米材料。在洗去
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种二维可调孔板样品支架及其在检测前列腺抗原中的应用。
2、具体技术方案如下：
3、一种二维可调孔板样品支架，包括第一旋钮、第二旋钮、左右移动平台、上下移动平台、载物台、第一齿轮、第二齿轮和连接杆，载物台的上表面开设有凸起结构，凸起结构的一侧边开设有第一齿纹结构，上下移动平台的下方开设有凹槽，上下移动平台的一侧开设有插入孔，第一齿轮设于连接杆的一端，且第一齿轮与第一齿纹结构啮合连接，连接杆的另一端依次穿过第二齿轮和插入孔，凹槽与凸起结构配合连接，左右移动平台的一端开设有第二齿纹结构，且第二齿纹结构插入上下移动平台的限位槽内，与第二齿轮啮合连接，左右移动平台的上表面设有孔板限位结构，第二旋钮与第二齿轮连接，第一旋钮与第一齿轮连接，第一齿轮的旋转带动上下移动平台相对载物台发生上下移动，第二齿轮的旋转带动左右移动平台相对上下移动平台发生左右移动。
4、进一步地，孔板限位结构包括限位条和至少两个限位卡件，限位条与第二齿纹结构平行设置，限位卡件设于限位条和第二齿纹结构之间，且对称设置，孔板安装在孔板限位结构处，支架整体按需进行上下左右移动，从而实现逐孔检测。
5、一种二维可调孔板样品支架在检测前列腺抗原中的应用，包括如下步骤：
6、1）采用高温共沉淀法制备nayf4:18% yb3+,2% er3+纳米粒子；
7、2）采用种子生长法制备nayf4:18% yb3+,2% er3+@nayf4核壳结构的荧光纳米材料ucnps；
8、3）将步骤2）所得的ucnps溶解于四氢呋喃中，另取聚乙二醇二羧酸(cpeg)溶解在四氢呋喃中，将两者混合，搅拌，加水和正己烷萃取，在去离子水中透析，使上转换荧光纳米材料转移至水中；
9、4）将步骤3）所得的经过cpeg修饰的ucnps分散在水中与标记抗体偶联，得到nayf4:18% yb3+,2% er3+@nayf4荧光探针；
10、5）在孔板上用移液枪向每孔中加入包被抗体溶液，在2-8 ℃冰箱中放置8 h，从冰箱中取出孔板，倒出孔内的液体，用洗涤缓冲液洗涤多次，每孔中加入bsa 封闭缓冲液封闭2 h，倒出孔中液体，洗涤，在孔中分别加入系列不同浓度的前列腺抗原溶液，静置1 h，倒出孔中液体，洗涤，向每孔中加入nayf4:18% yb3+,2% er3+@nayf4荧光探针纳米粒子溶液，静置1 h，倒出孔中液体，洗涤，拍干；
11、6）将孔板安装在孔板限位结构上，固定安装二维可调孔板样品支架，并设置好检测用光路系统，获得发射光谱，记录最佳发射峰的波长；
12、7）在最佳波长下，利用二维可调孔板样品支架移动孔板，对孔板进行逐孔荧光强度读数。
13、进一步地，步骤1）的具体操作过程为：将醋酸铒水合物、醋酸钇水合物、醋酸镱水合物溶于油酸和1-十八烯中，160℃下维持1h，达到配位目的，加入nh4f甲醇溶液和naoh甲醇溶液，在室温下维持30 min以达到成核的目的，抽至真空，通入氮气使反应始终在氮气氛围下进行，然后在290-300℃下维持1.5h，使晶体生长，反应结束后，反应液经过离心、洗涤、干燥得到nayf4:18% yb3+,2% er3+纳米粒子。
14、进一步地，步骤2）的具体操作过程为：将醋酸钇水合物溶于油酸和1-十八烯中，160℃下维持1h，达到配位目的，冷却至室温，加入步骤1）的nayf4:18% yb3+,2% er3+纳米材料作为核，加入nh4f甲醇溶液和naoh甲醇溶液，在室温下维持30 min，抽至真空，通入氮气使反应始终在氮气氛围下进行，然后在290-300℃下维持1.5h，反应结束后，反应液经过离心、洗涤、干燥得到ucnps。
15、进一步地，ucnps的颗粒粒径为20-60nm。
16、进一步地，步骤4）的具体操作过程为：将edc和nhs溶解在ph为6.1的0.1m的mes水溶液中，与步骤3）的经过cpeg修饰的ucnps混合，使其在室温下活化30-60min，将此溶液与前列腺标记抗体的硼酸缓冲液混合，室温下孵育60-120 min，孵育结束后离心得到上转换荧光探针，使其溶解在测定缓冲液中超声10 min，存放2-8 ℃冰箱中。
17、进一步地，步骤4）中ucnps与cpeg的比例为1:5、1:10或1:15。
18、进一步地，步骤5）中所述的包被抗体溶液为50mm碳酸氢钠或碳酸钠与0.05%叠氮化钠组成的ph=9.6的缓冲液，洗涤缓冲液为0.01%tweeen 20、0.05%叠氮化钠与50 mm磷酸二氢钠或磷酸氢二钠溶液组成的ph=7.4的缓冲液，bsa 封闭缓冲液为1%牛血清白蛋白、0.05%叠氮化钠与5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种二维可调孔板样品支架，其特征在于，包括第一旋钮（1）、第二旋钮（2）、左右移动平台（3）、上下移动平台（4）、载物台（5）、第一齿轮（6）、第二齿轮（7）和连接杆（8），载物台（5）的上表面开设有凸起结构（51），凸起结构（51）的一侧边开设有第一齿纹结构（511），上下移动平台（4）的下方开设有凹槽（41），上下移动平台（4）的一侧开设有插入孔（42），第一齿轮（6）设于连接杆（8）的一端，且第一齿轮（6）与第一齿纹结构（511）啮合连接，连接杆（8）的另一端依次穿过第二齿轮（7）和插入孔（42），凹槽（41）与凸起结构（51）配合连接，左右移动平台（3）的一端开设有第二齿纹结构（31），且第二齿纹结构（31）插入上下移动平台（4）的限位槽（43）内，与第二齿轮（7）啮合连接，左右移动平台（3）的上表面设有孔板限位结构（32），第二旋钮（2）与第二齿轮（7）连接，第一旋钮（1）与第一齿轮（6）连接，第一齿轮（6）的旋转带动上下移动平台（4）相对载物台（5）发生上下移动，第二齿轮（7）的旋转带动左右移动平台（3）相对上下移动平台（4）发生左右移动。
2.如权利
3.一种如权利要求2所述的二维可调孔板样品支架在检测前列腺抗原中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1）的具体操作过程为：将醋酸铒水合物、醋酸钇水合物、醋酸镱水合物溶于油酸和1-十八烯中，160℃下维持1h，达到配位目的，加入NH4F甲醇溶液和NaOH甲醇溶液，在室温下维持30 min以达到成核的目的，抽至真空，通入氮气使反应始终在氮气氛围下进行，然后在290-300℃下维持1.5h，使晶体生长，反应结束后，反应液经过离心、洗涤、干燥得到NaYF4:18% Yb3+,2% Er3+纳米粒子。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤2）的具体操作过程为：将醋酸钇水合物溶于油酸和1-十八烯中，160℃下维持1h，达到配位目的，冷却至室温，加入步骤1）的NaYF4:18% Yb3+,2% Er3+纳米材料作为核，加入NH4F甲醇溶液和NaOH甲醇溶液，在室温下维持30min，抽至真空，通入氮气使反应始终在氮气氛围下进行，然后在290-300℃下维持1.5h，反应结束后，反应液经过离心、洗涤、干燥得到UCNPs。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，UCNPs的颗粒粒径为20-60nm。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤4）的具体操作过程为：将EDC和NHS溶解在PH为6.1的0.1M的MES水溶液中，与步骤3）的经过cPEG修饰的UCNPs混合，使其在室温下活化30-60min，将此溶液与前列腺标记抗体的硼酸缓冲液混合，室温下孵育60-120 min，孵育结束后离心得到上转换荧光探针，使其溶解在测定缓冲液中超声10 min，存放2-8 ℃冰箱中。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤4）中UCNPs与cPEG的比例为1:5、1:10或1:15。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤5）中所述的包被抗体溶液为50mM碳酸氢钠或碳酸钠与0.05%叠氮化钠组成的pH=9.6的缓冲液，洗涤缓冲液为0.01%Tweeen 20、0.05%叠氮化钠与50 mM磷酸二氢钠或磷酸氢二钠溶液组成的pH=7.4的缓冲液，BSA 封闭缓冲液为1%牛血清白蛋白、0.05%叠氮化钠与50 mM磷酸二氢钠或磷酸氢二钠溶液组成的pH=7缓冲液。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤6）中的光路系统包括激光光源（101）、准直器（102）、第一凸透镜（103）、第二凸透镜（104）、狭缝（105）和光电倍增镜（106），准直器（102）设置在激光光源（101）前，激光光源（101）通过准直器（102）调节光源至孔板（9）上，光源折射至第一凸透镜（103），接着直射至第二凸透镜（104）后穿过狭缝（105）射至光电倍增镜（106）得到发射光谱，记录最佳发射峰波长。
...【技术特征摘要】
1.一种二维可调孔板样品支架，其特征在于，包括第一旋钮（1）、第二旋钮（2）、左右移动平台（3）、上下移动平台（4）、载物台（5）、第一齿轮（6）、第二齿轮（7）和连接杆（8），载物台（5）的上表面开设有凸起结构（51），凸起结构（51）的一侧边开设有第一齿纹结构（511），上下移动平台（4）的下方开设有凹槽（41），上下移动平台（4）的一侧开设有插入孔（42），第一齿轮（6）设于连接杆（8）的一端，且第一齿轮（6）与第一齿纹结构（511）啮合连接，连接杆（8）的另一端依次穿过第二齿轮（7）和插入孔（42），凹槽（41）与凸起结构（51）配合连接，左右移动平台（3）的一端开设有第二齿纹结构（31），且第二齿纹结构（31）插入上下移动平台（4）的限位槽（43）内，与第二齿轮（7）啮合连接，左右移动平台（3）的上表面设有孔板限位结构（32），第二旋钮（2）与第二齿轮（7）连接，第一旋钮（1）与第一齿轮（6）连接，第一齿轮（6）的旋转带动上下移动平台（4）相对载物台（5）发生上下移动，第二齿轮（7）的旋转带动左右移动平台（3）相对上下移动平台（4）发生左右移动。
2.如权利要求1所述的一种二维可调孔板样品支架，其特征在于，孔板限位结构（32）包括限位条（321）和至少两个限位卡件（322），限位条（321）与第二齿纹结构（31）平行设置，限位卡件（322）设于限位条（321）和第二齿纹结构（31）之间，且对称设置。
3.一种如权利要求2所述的二维可调孔板样品支架在检测前列腺抗原中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1）的具体操作过程为：将醋酸铒水合物、醋酸钇水合物、醋酸镱水合物溶于油酸和1-十八烯中，160℃下维持1h，达到配位目的，加入nh4f甲醇溶液和naoh甲醇溶液，在室温下维持30 min以达到成核的目的，抽至真空，通入氮气使反应始终在氮气氛围下进行，然后在290-300℃下维持1.5h，使晶体生长，反应结束后，反应液经过离心、洗涤、干燥得到nayf4:18% yb3+,2% er3+纳米粒子。
5.如权利要求4所述的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘再法，郭赛博，程煌裕，胡恬雨，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。