【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，尤其是涉及一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物及制备方法与应用。
技术介绍
1、卵孢木霉(trichoderma ovalisporum)，是一种植物内生真菌，被鉴定为木霉属的一员。木霉菌trichoderma spp.是全球广泛分布的一类丝状真菌，在土壤、植物和植物根际普遍存在，能够与植物叶片组织、皮层、根系形成共生关系在植物组织细胞间延伸成为内生真菌。在这种共生关系中，内生木霉菌可以产生多种抗生素、酶类和植物生长调节物质，这些物质可以对多种植物病原菌和害虫产生拮抗作用；其通过促进植物根系的发育和吸收营养物质的同时促进植物的生长和发育，提高植物的产量和品质；它还可以分解有机物质，释放出营养元素，促进土壤的肥力和健康，降解土壤中的有害物质，改善土壤环境等。内生木霉不仅可以对植物的生长、根系发育和营养成分的吸收产生积极影响，其活性成分对许多致病菌如金黄色葡萄球菌，耐万古霉素的大肠杆菌等均有抑制作用，具有显著的抗感染潜力，产生各种抗菌，抗感染成分等，木霉属植物内生真菌也被认定为重要的生防微生物资源。随着研究深入，它们的防治机理以及丰富的活性次级代谢产物也逐渐受到了广泛关注。此外，木霉属植物内生真菌具有重要的经济价值，它们可以作为生物控制剂或生物农药，抑制植物病原真菌的生长。木霉菌被认为是许多重要次级代谢产物的多产生产者，包括蛋白胨、聚酮、吡喃酮、非核糖体肽、铁载体、萜烯、类固醇、聚酮，和含氮化合物。目前已鉴定出约400种不同的分子，它们的结构新颖，具有抗真菌，抗细菌，细胞毒性，抗污，抗病毒等丰富的活性。>
2、十氢化萘衍生物是一类具有抗真菌活性、细胞毒性等作用的化合物，具有较高的研究价值，然而目前十氢化萘衍生物存在合成过程复杂、副反应多、产量低等缺陷，如shigeru okamoto等在2014年通过对eujavanoic acids a和b进行甲基化修饰，获得了系列具有抗真菌活性的十氢化萘衍生物，化学合成副反应较多，产物复杂，转化率不稳定，得率偏低[1]；qi liu等在2017年通过ii型阴离子接力化学(arc)构建多元醇侧链、ti催化的不对称diels-alder反应形成顺式十氢化萘骨架以及后期的炔烃-烯烃偶联反应首次全合成十氢萘类衍生物(-)-nahuoic acid ci(bii)，最长的线性步骤为16步，步骤复杂，得率低[2]；haoran dong等在2023年通过全合成手段获得了蚯蚓毒素pf1052/ab4015a、ab4015-l、ab4015-b和一种氢化天然产物衍生物ab4015-a2(四种十氢化萘衍生物，天然抗生素)，最长的线性步骤为21步，步骤繁多且易产生众多副反应，得率较低[3]。
3、[1]new decalin derivatives,eujavanoic acids a and b,fromeupenicillium javanicum[j].j.nat.prod.,67:1580-1583.
4、[2]liu q,deng y,smith a b,3rd.total synthesis of(-)-nahuoic acid c(i)(b(ii))[j].jam chem soc,2017,139(39):13668-13671.
5、[3]dong h,hu d,hong b,et al.total synthesis of diverse tetramic acidbearing cis-decalin natural products[j].angew chem int ed engl,2023,62(20):e202301872.
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是为了克服现有技术的缺陷而提供一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物及制备方法与应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术的技术方案之一为提供一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物，其结构通式为：
4、
5、其中
6、当r1＝时,r2＝h,为1-acetyl-tandyukising(1)；或
7、当r1＝时，r2＝h，为1-acetyl-trichoharzin(2)；或
8、当r1＝时，r2＝h,为1-acetyl-tandyukisind(3)；或
9、当r1＝h，r2＝为1-acetyl-tandyukisinb(4)；或
10、当r1＝h，r2＝为1-acetyl-tandyukisinl(5)；或
11、当r1＝h，r2＝为1-acetyl-tandyukisinh(6)。
12、在一些具体实施方式中，所述植物内生真菌为卵孢木霉17007，其保藏编号为cgmccno.40622。
13、卵孢木霉17007(trichoderma ovalisporum 17007)(即建议的分类命名为：卵孢木霉)，已于2023年5月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为cgmcc no.40622。
14、本专利技术的技术方案之二为提供一种如上述技术方案之一所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，所述十氢化萘衍生物是植物内生真菌卵孢木霉17007经过发酵分离获得。
15、在一些具体实施方式中，所述十氢化萘衍生物的制备方法包括如下步骤：
16、s1、卵孢木霉17007种子液培养：将含有卵孢木霉17007的平板菌种接种于种子液培养基中进行振荡培养，得到卵孢木霉17007种子液；
17、s2、发酵培养：将s1步骤得到的卵孢木霉17007种子液接种于真菌固体发酵培养基静置培养发酵，收取固体发酵物；
18、s3、分离纯化：
19、s3-1、将s2步骤得到的固体发酵物经乙酸乙酯萃取后，收集上清液；上清液通过减压回收溶剂获得粗产物；粗产物经石油醚、乙酸乙酯和甲醇进行三相萃取，取乙酸乙酯层减压浓缩得到粗提物浸膏；
20、s3-2、将s3-1步骤得到的粗提物浸膏溶于甲醇，通过减压正向硅胶柱层析，得到6个流份g1-g6，经薄层色谱检测分析，确定化合物集中在硅胶流分g1-g3中，合并g1-g3后使用sephadex lh-20凝胶色谱柱以100％甲醇作为流动相进行等度洗脱，得到27个子流份n1-n27，经薄层色谱以及lc-ms检测分析，确定化合物集中在凝胶流份n12-ν13中，n12-ν13流份通过半制备型rp-hplc再度纯化，使用ace-c18色谱柱，以4.0ml/min的流速进行梯度洗脱获得流份r1和r2，流动相洗脱程序为0-45min，10％-35％-50％-99％acn-h2o，之后仍然采用ace-c18色谱柱对流分r1进行45％meoh-h2o等度洗脱，最终获得化合物1-acetyl-ta本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物，其特征在于，其结构通式为：
2.根据权利要求1所述的一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物，其特征在于，所述植物内生真菌为卵孢木霉17007，其保藏编号为CGMCC No.40622。
3.一种如权利要求1所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，所述十氢化萘衍生物是植物内生真菌卵孢木霉17007经过发酵分离获得。
4.根据权利要求3所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，所述十氢化萘衍生物的制备方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，于S1步骤，含有卵孢木霉17007的平板菌种的培养方法为：在PDA固体平板培养基上接种卵孢木霉17007孢子，于28℃条件下静置培养7d，初时菌丝为白色，边缘整齐，菌丝匍匐疏松，生长至2-4d时，开始产生绿色孢子，无染菌时即可收取使用，即得到平板菌种。
6.根据权利要求4所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，于S1步骤，种
7.根据权利要求4所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，于S2步骤，真菌固体发酵培养基包括大米和水，其中大米：水(W:V)＝2：3，发酵的温度为28℃，发酵的时间为30-35d。
8.根据权利要求4所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，于S2步骤，卵孢木霉17007种子液的接种量为真菌固体发酵培养基体积的3％-5％。
9.一种分离得到如权利要求1所述十氢化萘衍生物的植物内生真菌，其特征在于，所述植物内生真菌为卵孢木霉17007，其保藏编号为CGMCC No.40622。
10.一种如权利要求1所述十氢化萘衍生物的应用，其特征在于，所述十氢化萘衍生物在制备抑菌剂中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物，其特征在于，其结构通式为：
2.根据权利要求1所述的一种来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物，其特征在于，所述植物内生真菌为卵孢木霉17007，其保藏编号为cgmcc no.40622。
3.一种如权利要求1所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，所述十氢化萘衍生物是植物内生真菌卵孢木霉17007经过发酵分离获得。
4.根据权利要求3所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，所述十氢化萘衍生物的制备方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述来源于植物内生真菌的十氢化萘衍生物的制备方法，其特征在于，于s1步骤，含有卵孢木霉17007的平板菌种的培养方法为：在pda固体平板培养基上接种卵孢木霉17007孢子，于28℃条件下静置培养7d，初时菌丝为白色，边缘整齐，菌丝匍匐疏松，生长至2-4d时，开始产生绿色孢子，无染菌时即可收取使用，即得到平板菌种。...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪婷，朱国良，王坤，张悦，时洁，吴慧敏，刘忠良，张立新，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：
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