【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为一种肿瘤免疫疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、肿瘤疫苗是肿瘤免疫治疗的一种有效手段，旨在通过诱导抗原特异性细胞毒t淋巴细胞(ctls)免疫反应，激活患者自身免疫系统对抗肿瘤。肿瘤疫苗分为预防型肿瘤疫苗和治疗型肿瘤疫苗，预防型肿瘤疫苗通过抑制致癌病毒的感染降低肿瘤的发生率，治疗型肿瘤疫苗通过激活免疫系统消除已成瘤的肿瘤细胞。
2、新型的治疗型肿瘤疫苗由三部分组成：表达于肿瘤细胞表面的肿瘤抗原(包括肿瘤抗原肽，以及编码肿瘤抗原的dna或mrna)，靶向抗原提呈细胞的载体以及作为免疫增强剂的佐剂。在靶向载体的作用下，负载的肿瘤抗原被递送至抗原提呈细胞，通过对抗原的加工处理后形成抗原肽，随后与胞内mhc-ⅰ分子结合形成复合物后被递呈至细胞表面，以交叉提呈方式激活cd8+ctls反应。尽管肿瘤疫苗取得了较大的进展，但抗原的低递送效率，弱免疫原性及载体的毒副作用等极大限制了其临床转化。因此，亟需寻找高效低毒的靶向递送载体及增强抗原免疫原性的佐剂以促进肿瘤疫苗的临床转化。
3、来源于酿酒酵母细胞壁的全葡聚糖颗粒(whole glucan particles,wgp)具有直径为2-4μm的中空球体结构，颗粒表面由β-1,3-d葡聚糖主链和β-1,6-d葡聚糖支链构成，可包载蛋白质，dna或sirna等核酸物质以及小分子药物。wgp是有效的免疫增强剂，通过表达于细胞表面的dectin-1分子被巨噬细胞(或树突状细胞，dcs)等免疫细胞识别并吞噬，从而诱导一系列的免疫反应。因此，利用wgp的特殊结构
技术实现思路
1、针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本专利技术提供了一种肿瘤免疫疫苗及其制备方法，该免疫疫苗通过wgp包载肿瘤抗原——鸡卵清蛋白(ovalbumin，ova)制备wgp-ova肿瘤疫苗，具有高效靶向递送抗原的能力，并且可以有效增强抗肿瘤的免疫功效。
2、本专利技术提供如下的技术方案：本专利技术提供了一种肿瘤免疫疫苗，具体为使用wgp包载肿瘤抗原——鸡卵清蛋白(ovalbumin，ova)制备wgp-ova肿瘤疫苗。
3、同时，本专利技术还提供了一种肿瘤免疫疫苗的制备方法，具体包括下述步骤：
4、(1)称取10mg wgp置于离心管，准备四的倍数组离心管；
5、(2)确定最佳包封率：ova用0.9％nacl将ova分别稀释至5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml四种不同浓度；
6、(3)向每支离心管加入50μl不同浓度的ova溶液；
7、(4)用底端封闭的玻璃吸管混合ova溶液和wgp至稠状膏体，确保所有的颗粒均匀潮湿，稍离心使混合物沉至管底；
8、(5)重复混匀，离心三次，得到均质膏状物，于4℃放置2小时，使ova扩散至wgp的空腔内，过夜冻干膏状物除去水分；为让剩余ova进入wgp颗粒空腔内，每支离心管内继续加50μl无菌水，按上述方法混匀三次，再次过夜冻干膏状物除去水分；
9、(6)将上述离心管预热至50℃，将trna溶液溶于0.9％盐水，调节浓度至25mg/ml得到trna饱和溶液，同时将trna饱和溶液置于50℃水浴锅孵育直至trna上清液澄清；
10、(7)取50μl饱和trna溶液加至离心管，混匀，离心，重复三次直至得到均一膏状物，将该膏状物于50℃孵育30min；
11、(8)为完成ova包载，继续加500μl浓度为5mg/ml的trna溶液至离心管，于50℃孵育1小时；所得溶液混匀，离心三次后收集并保存上清液，合并的上清液用于后续包封率的测定；
12、(9)沉淀颗粒重悬于1ml 0.9％nacl，超声10min(工作3s，间隔2s)，制得均匀悬浊液，悬浊液稀释为5×108wgp/ml(约为1mg/ml)后保存于-20℃备用。
13、采用上述结构本专利技术取得的有益效果如下：本专利技术提出的一种肿瘤免疫疫苗及其制备方法，所制备的肿瘤免疫疫苗利用wgp的特殊结构及免疫调节特性包载肿瘤抗原ova制备的肿瘤疫苗，既可靶向递送抗原至抗原提呈细胞，又能发挥免疫佐剂功能增强抗肿瘤免疫效应。
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1.一种肿瘤免疫疫苗，其特征在于，具体为使用WGP包载肿瘤抗原制备WGP-OVA肿瘤疫苗。
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤免疫疫苗，其特征在于，所述肿瘤抗原为鸡卵清蛋白。
3.根据权利要求1所述的一种肿瘤免疫疫苗的制备方法，其特征在于，具体包括下述步骤：
【技术特征摘要】
1.一种肿瘤免疫疫苗，其特征在于，具体为使用wgp包载肿瘤抗原制备wgp-ova肿瘤疫苗。
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤免疫...
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