【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于香蕉病毒检测，特别涉及一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的pcr引物、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、香蕉线条病毒(banana streak virus，bsv)属花椰菜花叶病毒科(caulimoviridae)，杆状病毒属(badnavirus)，是双链环状dna病毒，大小为7-9kb(harperet al,2005；费继锋等，2001)。迄今为止已报道了11种能引起香蕉线条病的bsv，而香蕉线条病毒ol(banana streak ol virus，bsolv)、香蕉线条病毒gf(banana streak gf virus，bsgfv)和香蕉线条病毒im(banana streak im virus，bsimv)是危害香蕉的三种主要bsv，这三种bsv可以整合在香蕉基因组中，在环境胁迫下，能从香蕉基因组中游离出来侵染香蕉(chabannes et al,2013)，引起香蕉线条病。游离态的bsolv、bsgfv和bsimv包括从香蕉基因组中游离出来的bsolv、bsgfv和bsimv，以及来源于外界侵染的bsolv、bsgfv和bsimv等，可以单独或复合侵染香蕉引起香蕉线条病，但在香蕉植株上产生的症状常因香蕉品种、病毒种类和自然环境的不同而不同(范武波等，2007)，有些被bsv侵染后的香蕉无症状；有的在叶片上出现断裂或连续的褪绿条纹，后期香蕉叶片上出现坏死斑(dahal et al,1998)。香蕉线条病初期症状与黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus，cmv)引起的花叶症状常常难以
2、香蕉是我国重要的经济作物，bsv是限制香蕉生产的重要病毒之一，影响我国香蕉产业的发展。由bsv引起的香蕉线条病具有危害严重，防控困难，容易发病等特点。感染了香蕉线条病的香蕉植株生长缓慢，产量降低，品质下降，目前对香蕉线条病尚无有效药剂防治。由于我国种植的香蕉大部分来源于组织培养生产的香蕉试管苗，因此香蕉吸芽或种苗中的病毒容易传递给子代；并且在组织培养过程中，整合在香蕉基因组中的bsv可以游离出来侵染香蕉。因此，建立有效的病毒检测方法可以及时淘汰带毒香蕉种苗，是预防该病害发生和流行的重要防控措施。
3、目前病毒检测方法主要有血清学和分子生物学方法。分子生物学方法比血清学方法灵敏度更高，以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，pcr)为代表的分子生物学方法广泛应用于不同病毒的检测(李媛媛等，2011)。单一pcr只能检测一种病毒，而多重pcr能同时检测多种病毒，减少了检测时间，节约了检测成本，该方法具有灵敏、快速、高效等特点，适合进行香蕉样品的快速检测。因此，研究设计一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的pcr引物、试剂盒及其应用具有广阔的前景。
4、参考文献：
5、[1]chabannes m,baurens fc,duroy po,et al.three infectious viralspecies lying in wait in the banana genome.j virol.2013,87(15):8624-37.
6、[2]dahal g,hughes jd,thottappilly g,et al.effect of temperature onsymptom expression and reliability of banana streak badnavirus detection innaturally infected plantain and banana(musa spp.).plant dis.1998,82(1):16-21.
7、[3]harper g,hart d,moult s,et al.the diversity of banana streak virusisolates in uganda archives of virology,2005,150(12):2407-2420.
8、[4]范武波,吴多清,王健华,等.香蕉条斑病毒及其所致病害研究进展.热带农业科学,2007,27(5):58-63.
9、[5]费继锋,肖火根,李华平,等.香蕉线条病毒病研究进展.病毒学报,2001,(4):381-385.
10、[6]何云蔚,陈秀,阮小蕾,等.香蕉线条病毒orfⅱ基因的原核表达及抗体制备.植物病理学报,2009,39(1):100-103.
11、[7]李媛媛,吴竹妍,黎园,等.香蕉3种主要病毒的多重pcr检测.植物检疫,2011,25(4):39-41.
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的pcr引物。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒。
3、本专利技术的另一目的在于提供上述pcr引物或试剂盒的应用。
4、本专利技术的再一目的在于提供一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法。
5、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
6、一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的pcr引物，包括bsolv引物组，bsgfv引物组和bsimv引物组中的至少一组；所述bsolv引物组包括引物bsolv-f/r；
7、bsolv-f：5’-gaagagcatgggcctcagaa-3’；
8、bsolv-r；5’-cgcatgccttgcagatagtc-3’；
9、所述bsgfv引物组包括bsgfv-f/r；
10、bsgfv-f：5’-gccttcatgacctggcgaat-3’；
11、bsgfv-r；5’-atgtacgggtgtattgccgc-3’；
12、所述bsimv引物组包括bsimv-f/r；
13、bsimv-f：5’-tcttagacacaggagctgcca-3’；
14、bsimv-r：5’-attcctccttccattgcacg-3’；
15、所述的pcr引物在制备同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒中的应用。
16、一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒，包括上述pcr引物。
17、所述试剂盒还包括pcr反应所需试剂；进一步为2×surper taq pcr starmix。
18、所述试剂盒还包括阳性对照，阴性对照，空白对照；其中，阳性对照为bsolv、bsgfv和bsimv三种病毒复合侵染的巴西蕉dna；阴性对照为健康的巴西蕉dna；空白对照为无菌双蒸水。
19、所述的pcr引物或试剂盒在检测香蕉中多种游离态香蕉线条病毒中的应用。
20、所述的香蕉线条病毒包括bsolv、bsgfv和b本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的PCR引物，其特征在于：包括BSOLV引物组，BSGFV引物组和BSIMV引物组中的至少一组；
2.权利要求书1所述的PCR引物在制备同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒中的应用，其特征在于：所述的香蕉线条病毒包括BSOLV、BSGFV和BSIMV中的至少一种。
3.一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的PCR引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR反应所需试剂、阳性对照，阴性对照，空白对照；其中，阳性对照为BSOLV、BSGFV和BSIMV三种病毒复合侵染的巴西蕉DNA；阴性对照为健康的巴西蕉DNA；空白对照为无菌双蒸水。
5.权利要求1所述的PCR引物或权利要求3～4任一项所述的试剂盒在检测香蕉中多种游离态香蕉线条病毒中的应用。
6.一种利用权利要求1所述PCR引物的同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法。
7.根据权利要求6所述的同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法，其特征在于：包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法，其特征在于：
9.根据权利要求8所述的同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法，其特征在于：
10.根据权利要求7～9任一项所述的同时检测多种游离态香蕉线条病毒的方法，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的pcr引物，其特征在于：包括bsolv引物组，bsgfv引物组和bsimv引物组中的至少一组；
2.权利要求书1所述的pcr引物在制备同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒中的应用，其特征在于：所述的香蕉线条病毒包括bsolv、bsgfv和bsimv中的至少一种。
3.一种同时检测多种游离态香蕉线条病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的pcr引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括pcr反应所需试剂、阳性对照，阴性对照，空白对照；其中，阳性对照为bsolv、bsgfv和bsimv三种病毒复合侵染的巴西蕉dna；阴性对照...
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