【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测试剂盒，尤其涉及呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)。
技术介绍
1、现有的检测呼吸道致病菌的技术以培养法为主流，针对不同类型的病菌，通过使用不同种类的试剂盒在培养基上进行培养，可对大多数的呼吸道致病菌进行检测，也可对病菌的耐药性进行检测，且成本低廉。然而培养法的检测时间和检测通量具有非常严重的短板：常规的培养法只能逐一检测病菌或耐药性，且需要3-7天的时间，对于已经严重感染，因急重症而进入icu的患者，根本不可能等待如此长的检测时间。同时，一些呼吸道感染病患可能携带不止一种致病菌，对数种不同的致病菌要进行结果清晰的完全检测，且可能还需要加上耐药性方面的检测，就培养法而言不仅操作方面不便(培养基逐个培养)，还需要花费相当的人力资源进行处理。
2、除培养法以外，pcr扩增法也越来越多被用于呼吸道致病菌和耐药基因检测。其中荧光定量pcr可将检测时间缩短至3小时，满足急重症快速检测的需要。同时，pcr法还拥有高于培养法的检测灵敏度，且单次检测成本低廉，适合常规检测使用。然而pcr法检测通量低，通常需要使用不同的引物对不同的致病菌基因和耐药基因进行扩增，因此在检测病原体对象和检测样本数量多的情境下会和培养法一样出现操作不便的情况，倘若将大量不同的引物混合进行扩增，又会因为引物之间灵敏度的不同，造成某些基因扩增程度差或无法扩增，进而造成检测灵敏度低，准确性差等问题。而当检测的样本数量较多时，还会造成检测成本的大量叠加使使用者难以承担，从而导致技术手段无法被实际运用。
3、相比
4、传统的微阵列基因芯片检测灵敏度和通量一般，虽检测结果准确性尚可，但也可能产生很高的背景信号造成结果准确性不佳。传统基因芯片的操作难度较高，操作流程较为繁复，可能需要苛刻的反应条件，并不适合在医疗中作为常规检测和快速检测的技术手段使用，多为科研实验中使用。
技术实现思路
1、针对
技术介绍
中存在的问题，提出呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)。
2、本专利技术提出呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，盒内含有pcr扩增反应和基因芯片杂交反应所需的所有试剂和耗材，使用方法如下：
3、先用特殊引物扩增dna，再通过特定的基因探针和基因芯片杂交，最后对一个样本里的多种呼吸道病原微生物及耐药基因同时进行检测。
4、优选的，引物扩增时，通过对序列经过特殊设计的，可精准捕捉样品中靶dna并与之结合、扩增的引物，按灵敏度提前进行分组，制备成缓冲液，再搭配试剂盒内含有的pcr管，使多种引物同时进行pcr扩增反应。
5、优选的，扩增缓冲液中含有阳性质控dna模板，通过杂交阳性质控dna模板的扩增产物，对pcr反应进行监测。
6、优选的，特定的基因探针包括可捕获致病菌基因/耐药基因的探针。
7、优选的，杂交时，通过添加带有cy5荧光修饰的内参，使其与基因芯片上的探针结合，基于不同荧光信号的强弱区分捕获目标基因的探针和未捕获目标基因的探针，得到杂交结果数据。
8、优选的，杂交后，使用清洗液对基因芯片进行清洗、晾干，扫描杂交信号并处理数据，得到检测结果。
9、优选的，上述技术应用于47种呼吸道感染致病菌和11种耐药基因的检测及鉴定，范围涵盖革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌。
10、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益的技术效果：
11、1、本专利技术针对特定的微生物基因和耐药基因设计扩增引物和基因探针，用引物对样本中的dna进行扩增，再用基因芯片对扩增后的dna进行杂交，可以同时检测出范围涵盖革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌的47种呼吸道病原微生物和11种耐药基因，是为任何现有技术所无法做到的。
12、2、本专利技术克服传统微阵列基因芯片/基因芯片检测灵敏度低、准确性不足，背景信号高、操作难度高，过程繁复等缺点，可应用于医疗方面的常规检测和快速检测，而传统微阵列基因芯片/基因芯片基本只可用于科研实验。
13、3、本专利技术检测过程耗时2-3小时，比二代测序所需的48小时更短，且灵敏度和准确性甚至优于二代测序。
14、4、本专利技术检测通量高，操作方便，只需培训使用者试剂盒的使用方法，不需要领域内专业人员也可以相对较少的人力应对大批量的样本检测。同时本专利技术的使用成本大大低于二代测序，在大批量样本检测的使用情境下也不易于造成成本的过高叠加，适合在常规检测中的大量使用以及在急重症治疗情境下的快速检测使用。
15、5、本专利技术对试剂和耗材按功能进行分类，并对试剂成分进行整合(如所有pcr反应所需成分，除模板dna外全部整合成一管溶液)，使试剂盒的使用极为方便。使用试剂盒时，无需额外预备任何试剂和耗材，也无需再逐一按成分配制试剂，实现一盒完成所有反应，大大提高检测效率。
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1.呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，盒内含有PCR扩增反应和基因芯片杂交反应所需的所有试剂和耗材，上述的所有试剂和耗材按功能进行分类，且试剂成分通过整合、优化得到；再通过与基因芯片杂交体系结合，为基因芯片杂交构建稳定且易于使用者操作的反应条件；
2.根据权利要求1所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，试剂包括A部分和B部分；A部分包括杂交试剂和杂交耗材；B部分包括PCR试剂；杂交试剂包括杂交液和1000X清洗液；杂交耗材包括基因芯片及盖片；PCR试剂包括PCR缓冲液，其中：
3.根据权利要求2所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，引物扩增时，通过对序列经过特殊设计，可精准捕捉样品中靶DNA并与之结合、扩增的引物，按灵敏度提前进行分组，制备成缓冲液，再搭配试剂盒内含有的PCR管，使多种引物同时进行PCR扩增反应。
4.根据权利要求2所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，通过杂交阳性质控DNA模板的扩增产物
5.根据权利要求1所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，特定的基因探针包括可捕获致病菌基因/耐药基因的探针。
6.根据权利要求1所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，杂交时，通过添加带有cy5荧光修饰的内参，使其与基因芯片上的探针结合，基于不同荧光信号的强弱区分捕获目标基因的探针和未捕获目标基因的探针，得到杂交结果数据。
7.根据权利要求1所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，杂交后，使用清洗液对基因芯片进行清洗、晾干，扫描杂交信号并处理数据，得到检测结果。
8.根据权利要求1-7任一项所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，上述技术应用于47种呼吸道感染致病菌和11种耐药基因的检测及鉴定，范围涵盖革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌。
...【技术特征摘要】
1.呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，盒内含有pcr扩增反应和基因芯片杂交反应所需的所有试剂和耗材，上述的所有试剂和耗材按功能进行分类，且试剂成分通过整合、优化得到；再通过与基因芯片杂交体系结合，为基因芯片杂交构建稳定且易于使用者操作的反应条件；
2.根据权利要求1所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，试剂包括a部分和b部分；a部分包括杂交试剂和杂交耗材；b部分包括pcr试剂；杂交试剂包括杂交液和1000x清洗液；杂交耗材包括基因芯片及盖片；pcr试剂包括pcr缓冲液，其中：
3.根据权利要求2所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检测试剂盒(基因芯片法)，其特征在于，引物扩增时，通过对序列经过特殊设计，可精准捕捉样品中靶dna并与之结合、扩增的引物，按灵敏度提前进行分组，制备成缓冲液，再搭配试剂盒内含有的pcr管，使多种引物同时进行pcr扩增反应。
4.根据权利要求2所述的呼吸道病原微生物及耐药基因核酸检...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡伟文，何操，颜飞地，范世睿，
申请(专利权)人：中山市康智芯源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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