用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物、方法及应用技术

本发明专利技术属于真菌检测技术领域，具体涉及一种用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物、方法及应用。本发明专利技术基于对烟曲霉三唑类药物耐药机制研究，建立了检测唑类耐药烟曲霉的Real‑time PCR方法。该方法为：提取待测样本中真菌DNA；以真菌DNA为模板，利用用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物包括引物对、探针和MGB封闭寡核苷酸进行实时荧光定量PCR检测，得到扩增曲线和Ct值；根据测得的扩增曲线和Ct值，实现三唑类耐药烟曲霉的定性和定量检测。该方法敏感性高，耗时短，特异性强，检测下限低至100CFU/每个反应，且能有效检出混合感染中耐三唑类药物的烟曲霉，在临床唑类耐药菌株的检测上具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于真菌检测，具体涉及一种用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物、方法及应用。

技术介绍

1、侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis，ia)是一种由曲霉感染引起的疾病，病原菌包括烟曲霉、黄曲霉、构巢曲霉、土曲霉和黑曲霉等，其主要发生于因癌症化疗、骨髓移植或免疫系统疾病导致免疫功能低下的人群中。ia已经成为各种重症免疫受损机体中最常见的机会性感染，也是患者致死的最主要原因。

2、目前临床治疗ia的主要药物包括三唑类、多烯类以及棘白菌素类。其中，三唑类药物又包括伊曲康唑、伏立康唑等。随着侵袭性曲霉病发病的日益增多，病原真菌对三唑类药物的耐药性也逐渐增加。曲霉对唑类药物的耐药现象最早由英国曼彻斯特大学的daviddenning团队于1997年报道。针对三唑类耐药烟曲霉菌株的检测，可进一步指导真菌感染的治疗，对于临床上选择恰当的抗真菌药物，具有十分重要的意义。

3、由于临床样本的培养阳性率非常低，分子检测方法是检测唑类耐药菌株的重要工具。目前三唑类耐药曲霉的分子检测手段非常有限，只有一小部分技术人员对其进行了研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下引物探针组合中的任一种或多种：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针5’端标记FAM，3’标记MGB。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MGB封闭寡核苷酸3’端修饰MGB。

4.用于检测三唑类耐药烟曲霉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1-3任一项所述的组合物。

5.权利要求1所述的组合物在制备用于检测混合感染中的三唑类耐药烟曲霉的试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，所述混合感染为三唑类耐药烟曲霉和三唑类敏感烟曲霉的混合感染。...

【技术特征摘要】

1.用于检测三唑类药物耐药烟曲霉的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下引物探针组合中的任一种或多种：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针5’端标记fam，3’标记mgb。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述mgb封闭寡核苷酸3’端修饰mgb。

4.用于检测三唑类耐药烟曲霉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1-3任一项所述的组合物。

5.权利要求1所述的组合物在制备用于检测混合感染中的三唑类耐药烟曲霉的试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，所述混合感染为三唑类耐药烟曲霉和三唑类敏感烟曲霉的混合感染。

6.利用权利要求1-3任一项所述的组合物定性和/或定量检测三唑类耐药烟曲霉的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，s2中，反应体系为dna模板2μl、taqpathproampmaster mix 10μl、正向引物1.5μl、反向引物1.5μl、探针0.5μl、mgb封闭寡核苷酸1μl、无核酸酶水补至20μl；反应条件为：stage1：95℃10min，1个循环；stage2：(92℃15s，

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁天宇，刘伟，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：