【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血浆蛋白s测定试剂盒领域，更具体地说，尤其涉及一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、复发性流产(rsa)是指连续发生3次或3次以上的自然流产，其临床表现为停经后阴道出血和腹痛，部分患者没有临床症状。在复发性流产的患者中能够明确其病因的约占50％，主要包括染色体异常、母体生殖道异常、免疫功能异常、内分泌因素、生殖道感染、宫颈机能不全及血栓形成倾向等，但仍有多数患者发生流产的病因尚不明确。
2、有研究提出rsa存在复发性微血栓形成倾向，其发病与机体凝血变化有关，体内纤维蛋白溶解与凝血系统失衡。抗凝血酶ⅲ(at-ⅲ)是血栓抑制剂，对失活凝血因子有活化作用，有研究显示其在血栓性疾病发生进展中发挥重要作用，可抑制血管血栓形成。蛋白c、蛋白s为维生素k依赖性蛋白，合成于肝，二者协同作用可激活凝血因子vα、凝血因子ⅷα，抑制血液凝固；
3、目前，对蛋白s进行定量检测的方法是凝固法，凝固法用蛇毒激活蛋白s后，加入到待测血浆中，其中蛋白s的含量对应着其血浆凝固时间的延长的比例，该方法能够特异性检测蛋白蛋白s的含量，但对结果的影响因素较多，检验人员的经验往往直接影响到检测结果的准确性和重复性；
4、为解决上述问题，本申请中提出一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒及其制备方法，具备价格低廉、全液体、试剂灵敏度高、特异性高、线性范围宽等特点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒及其制备方法，以解决
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒及其制备方法，包括盒体以及检测卡，所述检测卡安装于盒体的内部，所述盒体的一端开设有检测孔，所述盒体的上端开设有观测口。
4、进一步地，所述检测卡的内部依次组装有样本垫、第一结合垫、第二结合垫、nc膜以及吸水纸，所述第一结合垫覆盖在第二结合垫上。
5、进一步地，所述检测孔位于样本垫的上端用于滴放血清，所述观测口位于nc膜的上端用于观测测定数据。
6、一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒制备方法，所述检测卡2的制备方法包括以下步骤，
7、s1：样本垫、第一结合垫以及第二结合垫的处理，
8、s2：第一结合垫以及第二结合垫的喷涂，
9、s3：nc膜的划线，
10、s4：检验方法，
11、s5：性能验证，
12、所述s2的制备方法分为以下几步，
13、s2.1、荧光微球180～200nm与蛋白s抗体偶连及dnp-bsa偶连，
14、s2.2、喷涂作业，
15、所述s2.1的具体方法包括s2.1.1、s2.1.2、s2.1.3、s2.1.4，
16、所述s2.2的具体方法包括s2.2.1、s2.2.2。
17、进一步地，所述s1的制备具体方法如下，
18、s1.1：样本垫与第一结合垫以及第二结合垫处理液制备，在1l，ph＝8.0的硼酸缓冲液内加入0.5％～1％的s9，0.5％～1％的聚乙烯比咯烷酮，0.25％～5％的海藻糖；
19、s1.2：泡垫，在室温下，无菌托盘内装满样本垫及第一结合垫以及第二结合垫处理液，将第一结合垫以及第二结合垫浸泡在处理液内，浸泡时间为12h；
20、s1.3：干燥，将浸泡完成后的第一结合垫以及第二结合垫放置于42℃真空干燥箱中烘干8h。
21、进一步地，所述s2.1的具体方法如下，
22、s2.1.1、微球的活化，
23、在1ml的偶连缓冲液里加入25ul荧光微球1和25ul荧光微球2，将加有微球的偶连缓冲液置于常温水浴中超声30s，在20000g下离心12min，去除上清后，此步骤重复3次；
24、先加入5～6μl edc溶液，漩涡混匀，再加入20～25μlnhs溶液，在2～8℃水浴超声混匀，将离心管放置于水浴震荡箱上，常温，45r/min，避光活化20min；
25、s2.1.2、微球偶连，
26、将活化后的微球与蛋白s抗体按照如下比例偶连25～30ug蛋白s：1ml微球，将活化后的微球与dnp-bsa抗体按照如下比例偶连400～600ugdnp-bsa抗体：1ml微球。将混合后的微球与蛋白放置于水浴震荡箱上，常温，45r/min，避光偶连2h；
27、s2.1.3、微球封闭，
28、向离心管中加入0.5～0.75ml的微球封闭液，漩涡混匀，将离心管放置于水浴震荡箱上，37℃，30～40r/min，封闭45min；
29、s2.1.4、微球保存，
30、最终向离心管中加0.75ml微球保存液，常温超声混匀后获得蛋白s抗体微球标记物及dnp-bsa抗体微球标记物，2-8℃避光保存备用。
31、进一步地，所述s2.2的具体方法如下，
32、s2.2.1、喷涂液的配制，
33、在一定量的硼酸缓冲液内加入0.25％的海藻糖、0.15％～0.5％牛血清白蛋白(bsa)、0.5％～1％的proclin300；
34、s2.2.2、微球喷涂，
35、将蛋白s微球标记物用喷涂液稀释至15～20ug/ml，dnp-bsa抗体微球标记物稀释至15～20ug/ml；
36、将配制好的微球在冰水浴中超声分散后，用喷金划膜仪将步骤s1中的蛋白s微球标记物喷涂至1.8cm～2.4cm的第一结合垫上，用喷金划膜仪将步骤s1中dnp-bsa抗体微球标记物喷涂至1.5cm～1.8cm的第二结合垫上；
37、干燥，将喷涂有微球的第一结合垫及第二结合垫放置在37度的干燥箱内，干燥8h，获得干燥的第一结合垫、第二结合垫及干燥垫储存备用。
38、进一步地，所述s3的制备方法具体如下，
39、s3.1：划线液的配制，在一定量的磷酸缓冲盐溶液pbs内加入0.15％的氯化钠；
40、s3.2：将待划线的血浆蛋白s抗体用划线液配置成1～1.2mg/ml的t线划线液，将dnp抗体用划线稀释液配制成0.5～1mg/ml的c线划线稀释液；
41、s3.3：t、c线划线液配制完成后，用喷金滑膜仪划线，待划线好后，将nc膜放置在37℃条件下干燥12h。
42、进一步地，所述s4的具体方法如下，
43、s4.1取待测血清90ul，滴加进检测孔3内，待12～20min后，用干式荧光免疫分析仪进行检测获得数据。
44、进一步地，所述s5的具体方法如下，
45、s5.1、试剂盒的线性，
46、取高值血清50ug/ml，用已知的0值血清对高值血清进行倍比稀释，得到50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml、3.125ug/ml的样本，用已本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒及其制备方法，包括盒体(1)以及检测卡(2)，其特征在于：所述检测卡(2)安装于盒体(1)的内部，所述盒体(1)的一端开设有检测孔(3)，所述盒体(1)的上端开设有观测口(4)。
2.根据权利要求1所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述检测卡(2)的内部依次组装有样本垫(21)、第一结合垫(22)、第二结合垫(23)、NC膜(24)以及吸水纸(25)，所述第一结合垫(22)覆盖在第二结合垫(23)上。
3.根据权利要求1所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述检测孔(3)位于样本垫(21)的上端用于滴放血清，所述观测口(4)位于NC膜(24)的上端用于观测测定数据。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述检测卡(2)的制备方法包括以下步骤，
5.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述S1的制备具体方法如下，
6.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试
7.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述S2.2的具体方法如下，
8.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述S3的制备方法具体如下，
9.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述S4的具体方法如下，
10.根据权利要求4所述的一种血浆蛋白S免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征在于：所述S5的具体方法如下，
...【技术特征摘要】
1.一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒及其制备方法，包括盒体(1)以及检测卡(2)，其特征在于：所述检测卡(2)安装于盒体(1)的内部，所述盒体(1)的一端开设有检测孔(3)，所述盒体(1)的上端开设有观测口(4)。
2.根据权利要求1所述的一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述检测卡(2)的内部依次组装有样本垫(21)、第一结合垫(22)、第二结合垫(23)、nc膜(24)以及吸水纸(25)，所述第一结合垫(22)覆盖在第二结合垫(23)上。
3.根据权利要求1所述的一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述检测孔(3)位于样本垫(21)的上端用于滴放血清，所述观测口(4)位于nc膜(24)的上端用于观测测定数据。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种血浆蛋白s免疫层析测定试剂盒制备方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：李志会，余旭亮，汪雪琴，
申请(专利权)人：安徽恩禾生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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