【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术公开了重组融合蛋白，其表现出在癌性细胞中诱导凋亡的有效的生物活性。所述融合蛋白可用作治疗多种癌症的生物药物。
技术介绍
1、tnf相关的凋亡诱导配体(trail)基因最早在1995年由wiley等人克隆并命名[1]。1996年，同样的基因被克隆并命名为apo2l[2]。人trail基因编码的蛋白质从n-末端到c-末端含有胞质尾、跨膜区和胞外结构域。trail胞外结构域也可以通过蛋白水解裂解从细胞膜释放。全长膜结合trail和可溶性trail胞外结构域都形成稳定的同三聚体(homotrimer)，并结合它们的受体以发挥生物效应。大量的体内和体外实验表明，trail可以选择性地诱导许多肿瘤细胞和转化细胞(transformed cell)的凋亡。重组trail蛋白应用于荷瘤动物可以显著抑制肿瘤细胞生长，甚至导致肿瘤消退，而不对宿主造成明显损伤。
2、trail属于肿瘤坏死因子(tnf)超家族，是含有tnf同源胞外结构域的ii型膜蛋白，在溶液中形成稳定的同三聚体。tnf超家族成员调节多种细胞功能，包括免疫反应和炎症，以及增殖、分化、凋亡和胚胎发生。tnf超家族含有19个成员，它们通过与tnf受体超家族成员结合而发挥作用。
3、trail可以结合其受体trail-r1(dr4)和trail-r2(dr5)，将三个受体聚集在trail同三聚体周围，以启动下游信号传导。据报道，针对dr5的抗体与trail共同施用可以显著提高trail的活性，可能是通过进一步交联trail受体簇实现的[3]。此外，通过添加d
技术实现思路
1、在一个方面，本公开提供了融合多肽，其从n-末端到c-末端包含第一人trail胞外结构域、柔性接头、第二人trail胞外结构域；所述融合多肽在溶液中形成含有两个trail三聚体的六聚体；与野生型人trail相比，所述融合多肽表现出显著提高的在癌细胞中诱导凋亡的生物活性。
2、在一些实施方案中，与野生型人trail相比，所述融合多肽显示出改善的体内血浆半衰期。
3、在一些实施方案中，所述人trail胞外结构域可以选自但不限于trail残基114-281、trail残基118-281、trail残基119-281、trail残基120-281或trail残基122-281；并且所述第一trail胞外结构域和第二trail胞外结构域可以是相同的或不同的。
4、在一些实施方案中，所述融合多肽具有选自seq id no:2-11的蛋白序列。
5、在另一方面，本公开提供了包含上述融合多肽的融合蛋白。在一些实施方案中，所述融合蛋白包括但不限于含有所述融合多肽的igg fc融合蛋白和含有所述融合多肽的hsa(人血清白蛋白)融合蛋白。
6、在一些实施方案中，所述融合多肽可以是任何修饰的多肽，其中修饰包括但不限于peg化、脂质化和糖基化；修饰的融合多肽可以表现出延长的体内血浆半衰期或降低的免疫原性。
7、在另一方面，本公开提供了氨基酸序列与所述融合多肽具有至少90％序列同源性(homology)的多肽。
8、在另一方面，本公开提供了编码所述融合多肽或融合蛋白的多核苷酸序列。
9、在另一方面，本公开提供了包含所述融合多肽或融合蛋白以及生理学上可接受的赋形剂的药物组合物。
10、在另一方面，本公开提供了产生生物学上更有效的tnf(肿瘤坏死因子)超家族成员的方法，包含通过柔性接头连接两个tnf超家族成员分子，以构成六聚体，所述六聚体是两个tnf家族成员三聚体的六聚体；tnf家族成员包括但不限于tnf、4-1bbl、fas配体、ox40l、cd40l、cd256、cd257、cd258和gitrl。
11、另一方面，本公开提供了所述融合多肽或融合蛋白在制造用于治疗癌症的药物中的用途。
12、在一些实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤或肺癌。
13、在另一方面，本公开提供了治疗癌症的方法，包含向有此需要的受试者施用治疗有效量的所述融合多肽、融合蛋白或药物组合物。
14、在一些实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤或肺癌。本专利技术展示了“超trail”分子，其包含由柔性接头连接的两个人trail胞外结构域。与野生型trail相比，所述重组超trail蛋白显示出显著增强的在癌细胞中诱导凋亡的活性。由于分子量增加，超trail蛋白在施用于受试者时表现出与野生型trail相比改善的药代动力学特征。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.融合多肽，其从N-末端到C-末端包含第一人TRAIL胞外结构域、柔性接头、第二人TRAIL胞外结构域，其中所述融合多肽在溶液中形成含有两个TRAIL三聚体的六聚体。
2.权利要求1所述的融合多肽，其中所述融合多肽与野生型人TRAIL相比，表现出显著提高的在癌细胞中诱导凋亡的生物活性。
3.权利要求1或2所述的融合多肽，其中所述融合多肽与野生型人TRAIL相比，显示出改善的体内血浆半衰期。
4.权利要求1-3中任一项所述的融合多肽，其中所述第一人TRAIL胞外结构域和所述第二人TRAIL胞外结构域选自由TRAIL残基114-281、TRAIL残基118-281、TRAIL残基119-281、TRAIL残基120-281和TRAIL残基122-281组成的组。
5.权利要求1-4中任一项所述的融合多肽，其中所述第一TRAIL胞外结构域和所述第二TRAIL胞外结构域是相同的或不同的。
6.权利要求1-5中任一项所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含选自SEQ ID NO:2-11的氨基酸序列，或者包含与其至少90％相同的氨基
7.权利要求1-6中任一项所述的融合多肽，其中所述融合多肽通过聚乙二醇化、脂质化或糖基化修饰。
8.融合蛋白，其包含权利要求1-7中任一项所述的融合多肽。
9.权利要求8所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含IgG Fc或HSA(人血清白蛋白)。
10.多核苷酸序列，其编码权利要求1-7中任一项所述的融合多肽或权利要求8或9所述的融合蛋白。
11.药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项所述的融合多肽或权利要求8或9所述的融合蛋白，和生理学上可接受的赋形剂。
12.产生生物学上更有效的TNF(肿瘤坏死因子)超家族成员的方法，包括通过柔性接头连接两个TNF超家族成员分子，以构成六聚体，所述六聚体为两个TNF家族成员三聚体的六聚体。
13.权利要求12所述的方法，其中所述TNF家族成员选自由TNF、4-1BBL、Fas配体、OX40L、CD40L、CD256、CD257、CD258和GITRL组成的组。
14.权利要求1-7中任一项所述的融合多肽或权利要求8或9所述的融合蛋白在制造用于治疗癌症的药物中的用途。
15.权利要求14所述的用途，其中所述癌症是多发性骨髓瘤或肺癌。
16.治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-7中任一项所述的融合多肽、权利要求8或9所述的融合蛋白或权利要求11所述的药物组合物。
17.权利要求16所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤或肺癌。
18.权利要求1-7中任一项所述的融合多肽、权利要求8或9所述的融合蛋白或权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
19.权利要求18所述的融合多肽、融合蛋白或药物组合物，其中所述癌症是多发性骨髓瘤或肺癌。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.融合多肽，其从n-末端到c-末端包含第一人trail胞外结构域、柔性接头、第二人trail胞外结构域，其中所述融合多肽在溶液中形成含有两个trail三聚体的六聚体。
2.权利要求1所述的融合多肽，其中所述融合多肽与野生型人trail相比，表现出显著提高的在癌细胞中诱导凋亡的生物活性。
3.权利要求1或2所述的融合多肽，其中所述融合多肽与野生型人trail相比，显示出改善的体内血浆半衰期。
4.权利要求1-3中任一项所述的融合多肽，其中所述第一人trail胞外结构域和所述第二人trail胞外结构域选自由trail残基114-281、trail残基118-281、trail残基119-281、trail残基120-281和trail残基122-281组成的组。
5.权利要求1-4中任一项所述的融合多肽，其中所述第一trail胞外结构域和所述第二trail胞外结构域是相同的或不同的。
6.权利要求1-5中任一项所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含选自seq id no:2-11的氨基酸序列，或者包含与其至少90％相同的氨基酸序列。
7.权利要求1-6中任一项所述的融合多肽，其中所述融合多肽通过聚乙二醇化、脂质化或糖基化修饰。
8.融合蛋白，其包含权利要求1-7中任一项所述的融合多肽。
9.权利要求8所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含igg fc或hsa(人血清白蛋白)。
...【专利技术属性】
技术研发人员：钱信果，洪维，
申请(专利权)人：北京安信怀德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。