一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点DNA序列检测汞离子的方法技术

技术编号:40093438 阅读:22 留言:0更新日期:2024-01-23 16:34
本发明专利技术提供了一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点DNA序列检测汞离子的方法,包括以下步骤:S1:对载玻片表面进行化学修饰,包括氨基化玻片;S2:在修饰后的玻片上固定不同浓度的修饰Cy5荧光基团以及单个硫代磷酸化RNAHg<supgt;2+</supgt;切割PS位点的DNA探针以制备DNA芯片,包括:在修饰后的氨基化玻片引入活化后的GDYO固定带有氨基的DNA探针以制备DNA Ⅰ‑GDYO芯片;在DNA Ⅰ‑GDYO芯片的基础上引入NH<subgt;2</subgt;‑PEG‑N<subgt;3</subgt;层制备得到表面具有N<subgt;3</subgt;功能基团的DNA Ⅱ‑GDYO芯片;S3:通过微阵列扫描仪进行检测Hg<supgt;2+</supgt;的浓度。与现有的DNA芯片检测Hg<supgt;2+</supgt;相比,灵敏性得到显著提高,且洗脱后能够减少DNA与载玻片表面非特异性吸附,GDYO的引入能够增大模具与载玻片表面的结合力,从而减少检测误差。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种dna序列检测重金属的领域,更具体的是涉及一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法。


技术介绍

1、dna微阵列,也称为dna芯片,是一种先进的生物传感器技术。这种技术通过将带有荧光标记的寡核苷酸片段有序地、高密度地固定在载体表面,实现对待测物质的高灵敏度和高通量检测。因其便携性、低成本、高效益和高灵敏性,dna芯片已广泛应用于基因表达和诊断,以及蛋白质方面的检测。特别是在重金属污染现场检测方面,基于dna芯片的传感器已经显示出巨大的潜力。

2、在先前的研究中已有种具有管状三维结构的dna纳米结构微阵列,用于快速灵敏选择性监测多种重金属离子,同时开发了一种基于dna酶的微阵列芯片,用于多重监测水溶液中的重金属离子,特别是cu2+和pb2+。

3、石墨炔氧化物(gdyo)是一种新型的二维碳基纳米材料,因其具有高π共轭结构和高空穴迁移率,已被广泛用于dna传感器的制备。gdyo对dna上的fam荧光具有很强的淬灭效果,使基于gdyo的传感器具有更高的灵敏性。尽管基于dna芯片的传感器在重金属本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点DNA序列检测汞离子的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点DNA序列检测汞离子的方法,其特征在于,修饰Cy5荧光和PS位点的核酸序列为GTCACGAGTCACTATAGGAAGATGGCGAA/rA/*G-Cy5,辅助序列A为ACTCGTGACTTTTTTTTT-NH2,辅助序列B为ACTCGTGACTTTTTTTTT-DBCO,将相同浓度修饰PS切割位点和Cy5荧光基团的DNA序列分别与辅助序列和辅助序列等体积混合,4℃下反应12h,得到杂交DNA Ⅰ和杂交DNA ...

【技术特征摘要】

1.一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法,其特征在于,修饰cy5荧光和ps位点的核酸序列为gtcacgagtcactataggaagatggcgaa/ra/*g-cy5,辅助序列a为actcgtgacttttttttt-nh2,辅助序列b为actcgtgacttttttttt-dbco,将相同浓度修饰ps切割位点和cy5荧光基团的dna序列分别与辅助序列和辅助序列等体积混合,4℃下反应12h,得到杂交dna ⅰ和杂交dna ⅱ。

3.根据权利要求1所述的一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法,其特征在于,s1中氨基化玻片制备步骤包括:将载玻片加入到浓硫酸与双氧水体积比为7:3的混合液浸泡至少2h;超纯水洗涤3次,每次10min,晾干,获得羟基化载玻片;晾干的玻片浸泡在含有95%的乙醇和浓度为2%~3%aptes混合液中30min;超纯水洗涤3次,每次10min,并晾干,获得氨基化玻片。

4.根据权利要求1所述的一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法,其特征在于,s2中dna ⅰ-gdyo芯片的制备步骤包括:向氨基玻片上加入终浓度为2~8μg/ml活化后的gdyo,常温下反应12h,用移液枪吸去未完全反应的液体,超纯水洗涤后晾干,加入35~60nm修饰氨基基团的杂交dna ⅰ,4℃避光反应12h,从而将dna固定在玻片表面得到所述dna ⅰ-gdyo芯片。

5.根据权利要求1所述的一种基于生物芯片固定单个硫代磷酸化切割位点dna序列检测汞离子的方法,其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员:高力张瑶时海霞
申请(专利权)人:镇江永晨科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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