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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程,具体涉及一种启动子元件及其应用。
技术介绍
1、在哺乳动物中,aanat基因编码的芳基烷基胺-n-乙酰基转移酶是一种重要的胞质酶,也是褪黑素合成的限速酶。褪黑素的体内合成分多个反应步骤,血清素在合成限速酶aanat催化下生成n-乙酰血清素,而后在另外一个限速酶hiomt的催化下发生甲基化,最终生成褪黑素。另一个途径则为,血清素先接受hiomt催化生成5-甲氧基色胺(methoxytryptamine),而后再由aanat催化合成褪黑素。而在不同的物种中合成的通路可能不尽相同。在前人的研究中发现比目鱼松果体中的aanat基因能够影响甲状腺激素分泌,与发育存在一定关系。aanat的活性与mlt的分泌在节律上保持一致,aanat基因通过调控褪黑素的合成和分泌量来参与调控哺乳动物的昼夜节律以及繁殖性能。研究发现aanat基因的g619a突变与人的睡眠时相延迟综合症有关。
2、目前海南黑山羊的aanat基因在ncbi和ensmbl数据库中序列还不完全,尤其是核心启动子区域仍未可知,进而影响了对海南黑山羊褪黑素分泌研究的发展。
技术实现思路
1、为了解决上述至少一个问题,本公开提供了一种启动子元件及其应用。
2、根据本公开的第一方面,提供了一种启动子元件,该启动子元件包括如seq idno:19所示的核苷酸序列,或与其具有85%序列同一性的序列中的至少一种或多种。
3、在一些实施方式中,所述启动子元件来源于哺乳动物。
4、
5、在一些具体的实施方式中,所述哺乳动物为黑山羊。
6、在一些具体的实施方式中,所述哺乳动物为海南黑山羊。
7、在一些实施方式中,所述启动子元件来源于海南黑山羊aanat基因转录起始位点上游的-540bp~-958bp。
8、根据本公开的第二方面,提供了一种转录表达盒,所述转录表达盒包含第一方面所述启动子元件和靶蛋白编码序列,其中所述启动子元件可操纵连接所述靶蛋白编码序列。
9、在一些实施方式中,所述靶蛋白包括芳基烷基胺-n-乙酰基转移酶、羟基吲哚一氧一甲基转移酶或荧火虫荧光素酶。
10、在一些实施方式中,所述靶蛋白为芳基烷基胺-n-乙酰基转移酶。
11、在一些实施方式中,所述靶蛋白为海南黑山羊的芳基烷基胺-n-乙酰基转移酶。
12、根据本公开的第三方面,提供了一种表达载体,所述表达载体包含第一方面所述启动子元件或第二方面所述转录表达盒。
13、在一些实施方式中,所述表达载体选自原核表达载体、真核表达载体或病毒表达载体中的一种或多种。
14、根据本公开的第四方面,提供了一种宿主细胞,所述宿主细胞携带第一方面所述的启动子元件或第二方面所述转录表达盒或第三方面所述的表达载体中的一种或多种。
15、在一些实施方式中,所述宿主细胞选自原核细胞和真核细胞。
16、在一些具体的实施方式中,所述原核细胞包括细菌细胞、大肠杆菌、链霉菌。
17、在一些具体的实施方式中,所述真核细胞包括酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞。
18、在一些具体的实施方式中,所述哺乳动物细胞包括人、猴、小鼠、大鼠、仓鼠、山羊、绵羊、牛、猪、犬、猫。
19、在一些具体的实施方式中,所述真核细胞包括人类细胞、小鼠细胞、大鼠细胞、仓鼠细胞、山羊细胞、绵羊细胞或任何其它宿主细胞。
20、在一些实施方式中,所述哺乳动物细胞包括a549,wehi,3t3,10t1/2,bhk,mdck,cos1,cos7,bsc1,bsc40,bmt10,vero,wi38,hela,293细胞(可以表达功能性的腺病毒e1),saos,c2c12,l细胞,ht1080,hepg2。
21、在一些实施方式中,所述哺乳动物细胞包括成纤维细胞、肝细胞和成肌细胞。
22、在一些实施方式中,所述成纤维细胞选自胚胎成纤维细胞。
23、在一些实施方式中,所述成纤维细胞选自山羊胚胎成纤维细胞。
24、根据本公开的第五方面,提供了第一方面所述启动子元件或第二方面所述转录表达盒在调控基因表达中的应用。
25、本公开成功利用双荧光素酶报告基因系统鉴定海南黑山羊aanat启动子核心区域,筛选得到一种启动子元件,本公开所述启动子元件能够作为表达目的基因的顺式作用元件,增加靶蛋白基因的表达效果,具有较广泛的应用前景和应用潜力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种启动子元件,其特征在于:
2.根据权利要求1所述启动子元件,其特征在于,所述启动子元件来源于海南黑山羊AANAT基因转录起始位点上游的-540bp ~ -958bp。
3.一种转录表达盒,其特征在于,所述转录表达盒包含权利要求1所述启动子元件和靶蛋白编码序列,其中所述启动子元件可操纵连接所述靶蛋白编码序列。
4.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体包含权利要求1或2所述启动子元件或权利要求3所述转录表达盒。
5.一种宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞携带如权利要求1或2所述的启动子元件或权利要求3所述转录表达盒或携带如权利要求4所述的表达载体中的一种或多种。
6.权利要求1或2所述启动子元件或权利要求3所述转录表达盒在调控基因表达中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种启动子元件,其特征在于:
2.根据权利要求1所述启动子元件,其特征在于,所述启动子元件来源于海南黑山羊aanat基因转录起始位点上游的-540bp ~ -958bp。
3.一种转录表达盒,其特征在于,所述转录表达盒包含权利要求1所述启动子元件和靶蛋白编码序列,其中所述启动子元件可操纵连接所述靶蛋白编码序列。
4.一...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘国世,杨光,吴昊,张鲁,王冰源,秦宝春,姬鹏云,
申请(专利权)人:中国农业大学三亚研究院,
类型:发明
国别省市:
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