【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物成分检测领域，涉及一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的方法。
技术介绍
1、咖啡酰辅酶a(式1)和阿魏酰辅酶a(式2)都是梨次生代谢形成木质素过程中的关键中间代谢产物。通过研究咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的含量变化，有利于更好的研究梨的代谢途径。但是，咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的结构较为相近，使得其理化性质较为相似，现今尚未发现一种能够分离梨及其他植物中咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a，并对梨或其他植物中咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a含量进行检测的方法。
2、
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的方法。本专利技术提供的方法能够有效地分离咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a，而且能够分别检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的浓度。
2、为了实现以上目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的方法，包括色谱分离和检测，色谱分离的条件包括：色谱柱为c18柱；柱温为30℃；洗脱为经第一流动相、第二流动相和第三流动相依次进行第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱；
4、所述第一流动相、第二流动相和第三流动相独立地为乙腈-水体系；
5、所述第一流动相中乙腈和水的体积比为5～15：85～95；
6、所述第二流动相中乙腈和水的体积比为15～25︰75～85；
7、所述第三流动相中
8、所述第一流动相、第二流动相和第三流动相的ph均为3.0；
9、第一洗脱的时间为0～5min；第二洗脱的时间为5～35min；第三洗脱的时间为35～40min；
10、检测的条件包括：检测器为紫外检测器；检测波长为278nm；
11、根据检测得到的咖啡酰辅酶a峰面积和预定的咖啡酰辅酶a标准曲线，得到咖啡酰辅酶a的浓度；
12、根据检测得到的阿魏酰辅酶a峰面积和预定的阿魏酰辅酶a标准曲线，得到阿魏酰辅酶a的浓度。
13、优选地，所述流动相的ph值调节剂为磷酸盐缓冲溶液。
14、优选地，所述磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐的浓度为0.2wt％。
15、优选地，所述第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱的流速独立地为0.8～1.2ml/min。
16、优选地，色谱分离时，进样量为2μl。
17、优选地，色谱分离时，色谱柱为watersacquityuplc beh c18柱。
18、优选地，所述方法的上机样品的制备方法，包括以下步骤：
19、提取待测样品，得到提取液；
20、将所述提取液进行过滤，得到所述上机样品。
21、优选地，所述提取用溶剂为乙醇或甲醇。
22、优选地，所述过滤为采用孔径为0.4～0.5μm的滤膜过滤。
23、优选地，所述提取时，所述待测样品和提取的溶剂的用量比为1g：20～40ml。
24、本专利技术提供了一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的方法，包括色谱分离和检测，其特征在于，色谱分离的条件包括：色谱柱为c18柱；柱温为30℃；洗脱为经第一流动相、第二流动相和第三流动相依次进行第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱；所述第一流动相、第二流动相和第三流动相独立地为乙腈-水体系；所述第一流动相中乙腈和水的体积比为5～15：85～95；所述第二流动相中乙腈和水的体积比为15～25︰75～85；所述第三流动相中乙腈和水的体积比为5～15︰85～95；所述第一流动相、第二流动相和第三流动相的ph均为3.0；第一洗脱的时间为0～5min；第二洗脱的时间为5～35min；第三洗脱的时间为35～40min；检测的条件包括：检测器为紫外检测器；检测波长为278nm；根据检测得到的咖啡酰辅酶a峰面积和预定的咖啡酰辅酶a标准曲线，得到咖啡酰辅酶a的浓度；根据检测得到的阿魏酰辅酶a峰面积和预定的阿魏酰辅酶a标准曲线，得到阿魏酰辅酶a的浓度。本专利技术提供的方法能够有效地分离咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a，而且能够分别检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的浓度。本专利技术以高效液相色谱法对咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a进行检测，通过优化对流动相、洗脱程序的优化，从而实现对咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的分离和定量，为后续咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的检测提供了基础。
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1.一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶A和阿魏酰辅酶A的方法，包括色谱分离和检测，其特征在于，色谱分离的条件包括：色谱柱为C18柱；柱温为30℃；洗脱为经第一流动相、第二流动相和第三流动相依次进行第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的pH值调节剂为磷酸盐缓冲溶液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐的浓度为0.2wt％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱的流速独立地为0.8～1.2mL/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱分离时，进样量为2μL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱分离时，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEH C18柱。
7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法的上机样品的制备方法，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述提取用溶剂为乙醇。
9.根据权利要求
10.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述提取时，所述待测样品和提取的溶剂的用量比为1g：20～40mL。
...【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法同时检测咖啡酰辅酶a和阿魏酰辅酶a的方法，包括色谱分离和检测，其特征在于，色谱分离的条件包括：色谱柱为c18柱；柱温为30℃；洗脱为经第一流动相、第二流动相和第三流动相依次进行第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的ph值调节剂为磷酸盐缓冲溶液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐的浓度为0.2wt％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一洗脱、第二洗脱和第三洗脱的流速独立地为0.8～1.2ml/min。
5.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李国辉，张敏，张硕，杨磊，丁晓远，宋程，王燕，陈存武，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：
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