一种鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法及应用技术

本发明专利技术属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法及其应用。本发明专利技术所建立的鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法，其是通过原核表达制备的非洲猪瘟强、弱毒株共有的p30蛋白和强毒株特有而弱毒株不表达的CD2v和MGF505蛋白，并以p30、CD2v、MGF505蛋白作为包被抗原，建立了鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法。研究显示，本发明专利技术建立的方法操作简单，在一块酶标板上即可实现强、弱毒株鉴别，且具有灵敏度高，特异性强，重复性好，与市售商品化试剂盒符合率高等优点。本发明专利技术可用于鉴别非洲猪瘟野生型强毒株、CD2v或MGF505基因缺失弱毒株感染，且可为ASFV亚单位疫苗上市后的区分野毒与疫苗毒感染及免疫效果评价提供帮助，适合于ASFV抗体的大规模筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒检测，尤其涉及一种鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法。

技术介绍

1、非洲猪瘟(africanswinefever,asf)是由非洲猪瘟病毒(africanswinefevervirus,asfv)感染猪引起的一种高度接触性、烈性传染病，临床上猪感染急性asf致死率高达100％。世界动物卫生组织(woah)将其列为必须报告的疫病，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。

2、asfv是一种具有复杂分子结构的线性双链dna病毒，基因组全长介于170～190kb之间，可编码超过200种蛋白质，因asfv结构和功能尚无完全探明，严重阻碍了疫苗和特效药物的研发进程。其中，p30蛋白由cp204l基因编码，是asfv较为保守的免疫原性衣壳结构蛋白，可在病毒感染早期刺激机体产生具有一定中和能力的抗体，并且持续时间较长，是asfv理想的抗体诊断抗原；cd2v蛋白由ep402r基因编码，为asfv感染晚期表达蛋白，可使红细胞吸附于病毒感染细胞表面，从而促进病毒在宿主体内进行扩散传播，此外，ep402r基因的缺失可延长病毒血症产生时间，减轻本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法，其是以ASFVp30、CD2v、MGF505抗原为目的基因，以pET-32a为载体，成功构建重组质粒pET-32a-p30、pET-32a-CD2v、pET-32a-MGF505，通过原核表达系统获得包涵体表达的重组蛋白p30、CD2v、MGF505，并进行纯化，分别以纯化的p30、CD2v、MGF505重组蛋白作为包被抗原，建立了鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法。

2.根据权利要求1所述鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体ELISA检测方法，其特征在于，所述重组质粒pET-32a-p30、pET-32a-CD2v、pE...

【技术特征摘要】

1.一种鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法，其是以asfvp30、cd2v、mgf505抗原为目的基因，以pet-32a为载体，成功构建重组质粒pet-32a-p30、pet-32a-cd2v、pet-32a-mgf505，通过原核表达系统获得包涵体表达的重组蛋白p30、cd2v、mgf505，并进行纯化，分别以纯化的p30、cd2v、mgf505重组蛋白作为包被抗原，建立了鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法。

2.根据权利要求1所述鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法，其特征在于，所述重组质粒pet-32a-p30、pet-32a-cd2v、pet-32a-mgf505构建过程如下：

3.根据权利要求1所述鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法，其特征在于，重组蛋白p30、cd2v、mgf505的表达过程如下：

4.根据权利要求1所述鉴别非洲猪瘟强、弱毒株抗体elisa检测方法，其特征在于，重组蛋白p3...

【专利技术属性】
技术研发人员：左玉柱，范京惠，张帅，刘立辉，吴志勇，张增贤，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：