【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，具体为一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法。
技术介绍
1、人们熟知可以用蛋白水解酶水解酯。在某些情况下，当底物酯具有一个或多个手性碳原子时，该蛋白水解酶可以同外消旋混合物中的一种对映体比另一种对映体更快地反应。对于适当的底物，这种化学选择性可以用作该混合物拆分的基础。此种选择性水解反应的产物为反应的对映体的羧酸和醇，而未反应的对映体仍然为酯。随后所述酯和酸的易分离性成为羧酸或醇部分立体化学纯化的基础。
2、一般而言，当手性和复杂性残留于分子的羧酸部分时，则用酯酶或蛋白酶制备相应的手性酸，而当复杂性和手性残留于醇部分时，那么则用脂酶制备手性醇。然而，人们已知用脂酶拆分手性酸的部分实例。
3、该方法的立体化学纯度通常取决于外消旋物的每种异构体的水解速率，如相对速率差异越大，最终手性产物的纯度则越高。不论能否发现适当的酶，选择性水解给定的化合物的适当酶的选择通常凭经验决定。因此，作为有用的酶，该酶必须以所需化合物为底物、仅选择性水解适当的对映体并产生可接受的对映体过量。
4、参考中国专利公开号为cn1062604c的氨基酰化水解酶拆分混旋蛋氨酸制左旋蛋氨酸的方法，通过使用氨基酸酰化酶(e，c、3、5、1、14)作为水解酶，其效率高、收率78％，酶来源广，成本低；直接拆分，不需固化，产品与副产品分离回收工序简单。不足的是酶只能使用一次。
5、参考中国专利公开号为cn1306092a的固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸生产左旋氨基酸的方法，是载体便宜，容量大，固
6、综合分析以上参考专利，可得出以下缺陷：现有的苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法操作复杂，且酶解拆分后的产物杂质较多，从而导致产物纯度无法达到要求，不能实现通过采用控制底物与水解酶之间的反应速率来控制整个酶拆分产物的纯度，无法达到既高效又充分的对苯并二氮杂-乙酸酯进行酶拆分处理的目的，从而对苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分生产十分不利。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，解决了现有的苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法操作复杂，且酶解拆分后的产物杂质较多，从而导致产物纯度无法达到要求，不能实现通过采用控制底物与水解酶之间的反应速率来控制整个酶拆分产物的纯度，无法达到既高效又充分的对苯并二氮杂-乙酸酯进行酶拆分处理目的的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，具体包括以下步骤：
5、s1、将苯并二氮杂-乙酸酯加去离子水配兑成0.6-1.3mol/l的底物溶液，用ph调节剂调节ph，过滤于拆分釜中按每2000-3000ml过滤底液；
6、s2、使用阴离子交换树脂经平衡后，装柱，将水解酶制成1000-1500μ/ml水溶酶，在42-45℃以0.01-0.05ml/min·g载体的流速匀速通过载体柱，进行酶的固定化，当固定化酶活力达到300-400μ/g载体时，固酶完毕；
7、s3、将步骤s1的过滤液底物在40-50℃保温状态下，匀速通过步骤s2取的水解酶酶柱，在2-5℃保温20-30h进行酶拆分；
8、s4、拆分液升温到70-80℃加入脱色剂进行脱色处理，分批次过滤，然后得到的脱色过滤液在60-70℃真空减压浓缩至原体积的1/2-1/4，冷却至0-5℃，搅拌结晶后于0-6℃下结晶2-3h，离心分离，分离后经洗涤剂洗涤，干燥得产品。
9、优选的，所述步骤s1中ph调节剂为naoh溶液、na2co3溶液或nh3·h2o溶液中的一种，调节溶液ph为6.5-10，使配制的苯并二氮杂-乙酸酯底物溶液为弱碱性。
10、优选的，所述步骤s2中水解酶为为全细胞培养物、酶提取物、分离的酶或与大孔丙烯酸树脂连接的分离的酶，其中酶提取物是从新鲜动物内脏中进行提取的蛋白水解酶。
11、优选的，所述步骤s4中脱色剂为活性炭、活性白土或离子交换树脂中的一种，通过使用脱色剂将拆分液中的杂质进行吸附，从而脱色澄清。
12、优选的，所述步骤s3中过滤液底物通过酶柱的流速为0.01-0.03ml/min·g，通过控制过滤液底物通过酶柱的流速使过滤液底物与酶柱中的水解酶充分反应。
13、优选的，所述步骤s4中洗涤剂为乙醇或甲醇中的一种，且洗涤剂的加入量为底物重量2-5倍，通过利用洗涤剂溶解产物表面的有机成份，确保产物的纯度达到要求。
14、优选的，所述步骤s4中对脱色处理后的产物进行分批次过滤具体过程如下：
15、t1、先选择所需尺寸的滤网安装至过滤设备处，再将待滤液通过输送泵一次输送5-9ml通入滤网进行过滤处理；
16、t2、重复步骤t1操作5-9次，直至将待滤液全部过滤完成；
17、t3、收集过滤下来的滤液，并将过滤出来的滤渣排出清洗回收再利用。
18、优选的，所述步骤t1中所需滤网的尺寸为100-200目，通过采用这种尺寸的滤网能够将脱色剂与试剂之间充分的筛分出来，确保滤液中无杂质。
19、优选的，所述步骤s3中过滤液底物匀速通过水解酶酶柱时要使用加压泵，确保过滤液底物在水解酶酶柱中的压力达到0.05-0.1mpa，通过控制滤液供压的压力，来控制过滤液底物在酶柱中的流速。
20、优选的，所述步骤s4中干燥所采用的干燥设备为智能烘干机，在控制温度在70-90℃的条件下干燥处理。
21、(三)有益效果
22、本专利技术提供了一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，具体包括以下步骤：s1、将苯并二氮杂-乙酸酯加去离子水配兑成0.6-1.3mol/l的底物溶液，用ph调节剂调节ph，过滤于拆分釜中按每2000-3000ml过滤底液；s2、使用阴离子交换树脂经平衡后，装柱，将水解酶制成1000-1500μ/ml水溶酶，在42-45℃以0.01-0.05ml/min·g载体的流速匀速通过载体柱，进行酶的固定化，当固定化酶活力达到300-400μ/g载体时，固酶完毕，s3、酶解拆分，s4、脱色结晶成品化处理，可实现通过采用控制底物与水解酶之间的反应速率来控制整个酶拆本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S1中PH调节剂为NaOH溶液、Na2CO3溶液或NH3·H2O溶液中的一种，调节溶液PH为6.5-10，使配制的苯并二氮杂-乙酸酯底物溶液为弱碱性。
3.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S2中水解酶为为全细胞培养物、酶提取物、分离的酶或与大孔丙烯酸树脂连接的分离的酶，其中酶提取物是从新鲜动物内脏中进行提取的蛋白水解酶。
4.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S4中脱色剂为活性炭、活性白土或离子交换树脂中的一种，通过使用脱色剂将拆分液中的杂质进行吸附，从而脱色澄清。
5.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S3中过滤液底物通过酶柱的流速为0.01-0.03ml/min·g，通过控制过滤液底物通过酶柱的流速使过滤液底物与酶柱中的水解酶充分反应
6.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S4中洗涤剂为乙醇或甲醇中的一种，且洗涤剂的加入量为底物重量2-5倍，通过利用洗涤剂溶解产物表面的有机成份，确保产物的纯度达到要求。
7.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S4中对脱色处理后的产物进行分批次过滤具体过程如下：
8.根据权利要求7所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤T1中所需滤网的尺寸为100-200目，通过采用这种尺寸的滤网能够将脱色剂与试剂之间充分的筛分出来，确保滤液中无杂质。
9.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S3中过滤液底物匀速通过水解酶酶柱时要使用加压泵，确保过滤液底物在水解酶酶柱中的压力达到0.05-0.1MPa，通过控制滤液供压的压力，来控制过滤液底物在酶柱中的流速。
10.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤S4中干燥所采用的干燥设备为智能烘干机，在控制温度在70-90℃的条件下干燥处理。
...【技术特征摘要】
1.一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤s1中ph调节剂为naoh溶液、na2co3溶液或nh3·h2o溶液中的一种，调节溶液ph为6.5-10，使配制的苯并二氮杂-乙酸酯底物溶液为弱碱性。
3.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤s2中水解酶为为全细胞培养物、酶提取物、分离的酶或与大孔丙烯酸树脂连接的分离的酶，其中酶提取物是从新鲜动物内脏中进行提取的蛋白水解酶。
4.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤s4中脱色剂为活性炭、活性白土或离子交换树脂中的一种，通过使用脱色剂将拆分液中的杂质进行吸附，从而脱色澄清。
5.根据权利要求1所述的一种脂酶苯并二氮杂-乙酸酯的酶拆分方法，其特征在于：所述步骤s3中过滤液底物通过酶柱的流速为0.01-0.03ml/min·g，通过控制过滤液底物通过酶柱的流速使过滤液底物与酶柱中的水解酶充分反应。
6.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：江苏惠利生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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