【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及用于pluronic l64敏感性dna裸质粒肌注高效稳定表达的系统。
技术介绍
1、dna裸质粒基因治疗是目前治疗临床罕见遗传性疾病的常见基因治疗方式，然而限制这一常规方法进一步用于临床的技术最大瓶颈是，在骨骼肌细胞传递dna裸质粒时，不能在注射部位产生足量的治疗基因，进而达到临床治疗水平。
2、为了提高治疗基因的表达，现有技术采用包括借助电穿孔、超声囊泡、基因枪等物理手段，但是这些物理手段存在电流过强、局部高温高压等问题，会对人体组织造成不可逆的损伤，并且这些物理手段所用仪器昂贵、操作复杂。
3、现有技术中还有通过微针或微阵列经皮递送，然后借助负压抽吸进行dna分子的跨细胞膜递送。然而该技术dna分子递送深度为皮肤的表皮层或真皮层，深度为仅为皮肤下方2mm或更浅的皮肤，该方法虽然增加了皮肤细胞的透化和转染，但注射深度过浅，注射后负压抽吸时易导致注射分子外溢，损失大量dna分子丢失。另外该方法中皮肤细胞表达dna分子为瞬时表达，主要适用于一次性注射dna疫苗，注射14天后dna分子表达就很低，对于需要多次注射dna疫苗或者需要dna分子长期稳定表达的遗传性疾病尚不能满足。
4、因此，提供一种使dna裸质粒高效长期稳定表达的系统，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，提供一种用于pluronic l64敏感性dna裸质粒肌注高效稳定表达的系统，解决现有技术中临床dna裸质粒基因治
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术公开的用于pluronic l64敏感性dna裸质粒肌注高效稳定表达的系统，所述系统包括pluronic l64敏感性裸质粒、pluronic l64和负压抽吸装置，pluronic l64敏感性裸质粒和pluronic l64临用前混合，得到混合液，所述混合液用于肌肉注射，所述负压装置用于对肌注后部位进行抽吸。
4、本专利技术通过pluronic敏感性dna裸质粒和pluronic l64的预混，肌肉注射到骨骼肌组织，通过pluronic l64的溶酶体逃逸协助能力和入核佐剂性质，协助注射部位的pluronic敏感性dna裸质粒从骨骼肌细胞的溶酶体及时逃逸并入核得以大量表达，同时pluronic l64自身理化性质形成一个dna裸质粒缓慢释放微环境。在一段适宜时间后给予注射部位负压抽吸，利用负压引起的免疫微炎症，导致大量免疫细胞聚集在注射部位，借助免疫细胞将注射部位的dna裸质粒运输到周边更远的区域，使更多的骨骼肌细胞接触到dna裸质粒，进而使表达dna裸质粒的骨骼肌数量更多。本专利技术可以增强基因缺失型罕见遗传病的治疗和肌注dna疫苗的有效性。本专利技术的系统在使用时，可以先肌注再负压抽吸，也可以先负压抽吸再肌注。
5、本专利技术部分实施方案中，所述混合液中，pluronic l64敏感性裸质粒的总质量为2～20μg，混合液体积小于等于25μl。优选地，混合液体积为1-25μl。
6、本专利技术部分实施方案中，所述混合液中，pluronic l64敏感性裸质粒的总质量为10μg。
7、本专利技术部分实施方案中，所述混合液中pluronic l64质量体积浓度为0.04-0.2％，当质量单位为g时，体积浓度为ml。
8、本专利技术部分实施方案中，所述混合液中pluronic l64的质量体积浓度为0.08-0.1％。
9、本专利技术部分实施方案中，所述混合液中pluronic l64的质量体积浓度为0.1％。
10、本专利技术部分实施方案中，所述负压抽吸装置的负压范围为10～100kp。
11、本专利技术部分实施方案中，所述负压抽吸装置的负压为40-65kp。
12、本专利技术部分实施方案中，临用前，将所述pluronic l64敏感性裸质粒和pluronicl64混合，静置2～50min，优选30min后在肌肉注射。本专利技术的负压抽吸装置为现有技术，包括吸痰器、负压拔火罐等。
13、本专利技术中所述的pluronic l64敏感性裸质粒是指启动子为cmv 1的dna质粒，包括pcmv-luc、pcmv-e2、pcmv-gfp、pcmv-lacz、psc-lacz、sp301。
14、本专利技术的一实施例中采用的pluronic l64敏感性裸质粒为psc-lacz、sp301。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
16、本专利技术设计科学，构思巧妙，创造性地建立了pluronic l64敏感性裸质粒/pluronic l64/结合负压抽吸装置的dna裸质粒基因骨骼肌传递系统。采用该系统不仅能较好地促进外源dna基因的表达，同时避免了电穿孔、超声囊泡、基因枪等常用物理手段所需的仪器昂贵、操作复杂等缺点；也克服了经皮负压抽吸的dna分子外溢和瞬时表达的问题。本专利技术的系统具有低成本、易操作、且高效稳定递送外源治疗基因特点，将有助于推进基于pluronic敏感性裸质粒dna裸质粒的基因治疗和疫苗开发。
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1.用于pluronic L64敏感性DNA裸质粒肌注高效稳定表达的系统，其特征在于，所述系统包括Pluronic L64敏感性裸质粒、Pluronic L64和负压抽吸装置，Pluronic L64敏感性裸质粒和Pluronic L64临用前混合，得到混合液，所述混合液用于肌肉注射，所述负压装置用于对肌注部位进行抽吸。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述混合液中，Pluronic L64敏感性裸质粒的总质量为2～20μg。
3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述混合液中，Pluronic L64敏感性裸质粒的总质量为10μg。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的系统，其特征在于，所述混合液中Pluronic L64质量体积浓度为0.04-0.2％，当质量单位为g时，体积浓度为ml。
5.根据权利要求4的系统，其特征在于，所述混合液中Pluronic L64的质量体积浓度为0.08-0.1％。
6.根据权利要求5的系统，其特征在于，所述混合液中Pluronic L64的质量体积浓度为0.1％。>
7.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述负压抽吸装置的负压范围为10～100kp。
8.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述负压抽吸装置的负压为40-65kP。
9.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，临用前，将所述Pluronic L64敏感性裸质粒和Pluronic L64混合，静置2～50min，优选30min后再肌肉注射。
...【技术特征摘要】
1.用于pluronic l64敏感性dna裸质粒肌注高效稳定表达的系统，其特征在于，所述系统包括pluronic l64敏感性裸质粒、pluronic l64和负压抽吸装置，pluronic l64敏感性裸质粒和pluronic l64临用前混合，得到混合液，所述混合液用于肌肉注射，所述负压装置用于对肌注部位进行抽吸。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述混合液中，pluronic l64敏感性裸质粒的总质量为2～20μg。
3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述混合液中，pluronic l64敏感性裸质粒的总质量为10μg。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的系统，其特征在于，所述混合液中pluronic l64质量...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈建林，赵欢，曹宇，周媛媛，尹靖雯，杨柳菲阳，蒋淳伊，
申请(专利权)人：成都医学院，
类型：发明
国别省市：
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