一种配套使用的大鼠胚胎冻存-复苏体系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了提供一种大鼠胚胎冻存预处理液，其组成为基础培养基，丙二醇95～110 mL/L、聚乙烯醇0.8～1.5 g/L、抗生素适量，并且，本发明专利技术还提供了一种包含前述的大鼠胚胎冻存预处理液的大鼠胚胎冻存‑复苏体系。本发明专利技术能够突破大鼠种质资源保存的瓶颈，配套使用的大鼠胚胎冻存‑复苏体系的应用可以使得大鼠胚胎的冻存‑复苏，及随后的人工辅助生殖得以顺利进行，尤其是针对纯合基因型的大鼠资源，将自然繁殖所需的数月时间大大减少为一个月内即可获得SPF级的后代，可快速获得特定基因型或基因修饰后的大鼠资源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物保种，具体涉及一种配套使用的大鼠胚胎冻存-复苏体系及其应用。

技术介绍

1、随着各种基因编辑技术的飞速发展，特别是在实验动物行业中出现了各种珍贵的基因修饰品系，保存这些品系的生物保种技术也被广泛应用，探寻更高效成功率的保种技术值得更深入的研究。冷冻技术主要包括慢速冷冻技术和玻璃化冷冻技术，慢速冷冻技术的低成活率限制了该方法在生物保种技术中的应用。

2、1985年，rall和fahy提出玻璃化冷冻技术之后，玻璃化冷冻技术已经被广泛应用于各种实验动物的胚胎冷冻中。玻璃化冷冻技术(vitrification)是指在室温将胚胎放置高浓度的冷冻保护剂中快速转入液氮中，而冷冻保护剂由液态形成一种类似玻璃的非结构状态，保持着正常的离子分布减少了对冻存胚胎的损伤。玻璃化冷冻技术中高浓度冷冻保护剂和快速的冷冻速度是两个关键步骤。浓度很高的冷冻保护剂具有一定的毒性，可能对胚胎造成一定的损伤，寻找毒性低的冷冻保护剂是提高冷冻效果的办法之一。冷冻胚胎最终放置-196℃的液氮中，温度跨度很大，低温损伤冰晶的形成都是在这个过程中造成的，一般形成于-5℃到本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大鼠胚胎冻存预处理液，其组成为基础培养基，丙二醇95～110 mL/L、聚乙烯醇0.8～1.5 g/L、抗生素适量。

2.根据权利要求1所述的大鼠胚胎冻存预处理液，其特征在于，所述基础培养基的组分包括：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸二氢根离子、硫酸根离子、碳酸氢根离子、丙酮酸根离子、乳酸根离子、葡萄糖。

3.根据权利要求2所述的大鼠胚胎冻存预处理液，其特征在于，所述基础培养基的组成为：氯化钠95～105 mmol/L，氯化钾4～5 mmol/L，氯化钙5～6 mmol/L，磷酸二氢钾0.3～0.5 mmol/L，硫酸镁 0.2～0.3 mmo...

【技术特征摘要】

1.一种大鼠胚胎冻存预处理液，其组成为基础培养基，丙二醇95～110 ml/l、聚乙烯醇0.8～1.5 g/l、抗生素适量。

2.根据权利要求1所述的大鼠胚胎冻存预处理液，其特征在于，所述基础培养基的组分包括：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸二氢根离子、硫酸根离子、碳酸氢根离子、丙酮酸根离子、乳酸根离子、葡萄糖。

3.根据权利要求2所述的大鼠胚胎冻存预处理液，其特征在于，所述基础培养基的组成为：氯化钠95～105 mmol/l，氯化钾4～5 mmol/l，氯化钙5～6 mmol/l，磷酸二氢钾0.3～0.5 mmol/l，硫酸镁 0.2～0.3 mmol/l，碳酸氢钠24～25 mmol/l，丙酮酸钠 0.3～0.4mmol/l，乳酸钠17.5～19.0 mmol/l，葡萄糖2～3.5 mmol/l。

4.一种大鼠胚胎冻存-复苏体系，其特征在于，所述冻存-复苏体系包括大鼠胚胎冻存预处理液、大鼠胚胎冻存保护液和大鼠胚胎复苏液，其中：

5.根据权利要求4所述的冻存-复苏体系，其特征在于，所述大鼠胚胎冻存保护液含有：蔗糖0.3～0.4 mol/l、丙二醇90～150 ml/l、聚乙烯醇0.8～1.5 g/l、乙二醇 250～400ml/l、per...

【专利技术属性】
技术研发人员：林祁远，苏翠，黎肖容，
申请(专利权)人：广州赛业百沐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：