【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗原结合分子与链霉亲和素突变体的融合蛋白、以及其利用。
技术介绍
1、亲和素与生物素、或者链霉亲和素与生物素之间的亲和性非常高(kd＝10-15-10-14m)，作为生物双分子间的相互作用，为最强的相互作用之一。目前，亲和素/链霉亲和素-生物素相互作用在生物化学、分子生物学或者医学领域被广泛应用。已经设计了将亲和素/链霉亲和素与生物素的高结合能力和抗体分子组合的药物递送方法和预靶向法。关于这些研究，专利文献1中报道了：降低了对天然生物素的亲和性的链霉亲和素突变体、以及对于该对天然生物素呈低亲和性的链霉亲和素突变体具有高亲和性的生物素修饰二聚体。
2、现有技术文献
3、专利文献
4、专利文献1：国际公开wo2015/125820
技术实现思路
1、专利技术所要解决的问题
2、本专利技术以提供用于在癌症的治疗或诊断中使用的、识别癌细胞等的分子与链霉亲和素突变体的融合蛋白作为所应解决的课题。进一步地，本专利技术以提供使用了上述融合蛋白的、癌症的治疗手段或癌症的诊断手段作为所应解决的课题。
3、用于解决课题的手段
4、为了解决上述课题，本专利技术人进行了深入研究，结果选择了分子量小于抗体的分子作为识别癌细胞的分子，调制了上述分子与链霉亲和素突变体的融合蛋白。并且，发现了通过使用上述融合蛋白、和生物素修饰二聚体与酞菁染料的缀合物的光免疫疗法，可抑制癌细胞的增殖(生长)，从而完成了本专利技术。
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6、<1>融合蛋白，其中，分子量20,000以下的抗原结合分子经由接头序列结合在序列号1(seq id no:1)中记载的氨基酸序列(但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失)的n末端侧和/或c末端侧。
7、<2>权利要求1所述的融合蛋白，其从n末端侧到c末端侧依次具有分子量20,000以下的抗原结合分子、接头序列和序列号1中记载的氨基酸序列(但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失)。
8、<3><1>或<2>所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与癌细胞中表达的抗原结合的分子。
9、<4><1>至<3>中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与her2结合的分子。
10、<5><1>至<4>中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子具有序列号2中记载的氨基酸序列。
11、<6><1>至<5>中任一项所述的融合蛋白，其中，接头序列由甘氨酸残基和丝氨酸残基构成，且氨基酸残基的数目为5至25个。
12、<7><1>至<6>中任一项所述的融合蛋白，其中，接头序列为以[(gly)m-ser]n(式中，m表示1～10的整数，n表示1～5的整数)表示的氨基酸序列。
13、<8><1>至<7>中任一项所述的融合蛋白，其具有序列号4中记载的氨基酸序列(但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失)。
14、<9>核酸，其编码具有序列号4中记载的氨基酸序列(但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失)的融合蛋白。
15、<10>癌症治疗剂或癌症诊断剂，其包含<1>至<8>中任一项所述的融合蛋白。
16、<11>癌症的治疗或诊断试剂盒，其包含：(1)<1>至<8>中任一项所述的融合蛋白；和(2)以下述式(1)表示的化合物或其盐与诊断用物质或治疗用物质的缀合物：
17、[化学式1]
18、
19、(式中，
20、x1a、x1b、x2a和x2b各自独立地表示o或nh，
21、y1和y2各自独立地表示c或s，
22、z1和z2各自独立地表示o、s或nh，
23、v1和v2各自独立地表示s或s+-o-，n1和n2各自独立地表示0或1的整数，
24、l1和l2各自独立地表示2价连接基团，
25、l3为末端包含可与诊断用物质或治疗用物质结合的官能团的基团，
26、l4表示3价连接基团)。
27、<12><11>所述的试剂盒，其中，诊断用物质或治疗用物质为酞菁染料。
28、<13><1>至<8>中任一项所述的融合蛋白的制造方法，其包括使编码<1>至<8>中任一项所述的融合蛋白的核酸在宿主中表达的工序。
29、<14><13>所述的方法，其中，使上述融合蛋白在细菌的包涵体中表达并回收。
30、专利技术效果
31、通过使用本专利技术的抗原结合分子与链霉亲和素突变体的融合蛋白，例如可抑制癌细胞的增殖。
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1.融合蛋白，其中，分子量20,000以下的抗原结合分子经由接头序列结合在序列号1中记载的氨基酸序列的N末端侧和/或C末端侧，但C末端的由Pro-Ser-Ala-Ala-Ser His-His-His-His-His-His构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
2.权利要求1所述的融合蛋白，其从N末端侧到C末端侧依次具有分子量20,000以下的抗原结合分子、接头序列和序列号1中记载的氨基酸序列，但C末端的由Pro-Ser-Ala-Ala-Ser His-His-His-His-His-His构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
3.权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与癌细胞中表达的抗原结合的分子。
4.权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与Her2结合的分子。
5.权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子具有序列号2中记载的氨基酸序列。
6.权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中，接头序列由甘氨酸残基和丝氨酸残基构成，且氨基酸残基的数目为5至25个。
7.
8.权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其具有序列号4中记载的氨基酸序列，但C末端的由Pro-Ser-Ala-Ala-Ser His-His-His-His-His-His构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
9.核酸，其编码具有序列号4中记载的氨基酸序列的融合蛋白，但C末端的由Pro-Ser-Ala-Ala-Ser His-His-His-His-His-His构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
10.癌症治疗剂或癌症诊断剂，其包含权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白。
11.癌症的治疗或诊断试剂盒，其包含：(1)权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白；和(2)以下述式(1)表示的化合物或其盐与诊断用物质或治疗用物质的缀合物：
12.权利要求11所述的试剂盒，其中，诊断用物质或治疗用物质为酞菁染料。
13.权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白的制造方法，其包括使编码权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白的核酸在宿主中表达的工序。
14.权利要求13所述的方法，其中，使上述融合蛋白在细菌的包涵体中表达并回收。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.融合蛋白，其中，分子量20,000以下的抗原结合分子经由接头序列结合在序列号1中记载的氨基酸序列的n末端侧和/或c末端侧，但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
2.权利要求1所述的融合蛋白，其从n末端侧到c末端侧依次具有分子量20,000以下的抗原结合分子、接头序列和序列号1中记载的氨基酸序列，但c末端的由pro-ser-ala-ala-ser his-his-his-his-his-his构成的氨基酸序列可部分或全部缺失。
3.权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与癌细胞中表达的抗原结合的分子。
4.权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子为与her2结合的分子。
5.权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中，抗原结合分子具有序列号2中记载的氨基酸序列。
6.权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中，接头序列由甘氨酸残基和丝氨酸残基构成，且氨基酸残基的数目为5至25个。
7.权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中，接头序列为以[(gly)m-ser]...
【专利技术属性】
技术研发人员：田中十志也，儿玉龙彦，金井求，山次健三，巽俊文，高桥和希，杉山晓，塚越雅信，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：
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