【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物标志物分析检测领域，具体涉及一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂及其应用。
技术介绍
1、喉癌(lc)是头颈部第二大常见的恶性肿瘤，喉部的不典型增生，声带白斑，乳头状瘤等疾病易转化为喉癌。虽然早期lc预后较好，五年生存率可达80％，但lc具有隐匿性，易被忽视，大部分患者就诊时已发展至中晚期，错失了最佳治疗时期。尽管化疗、放疗等手段可在一定程度上缓解病情，但5年生存期仍低至61％。虽然显微喉镜结合病理组织活检仍是现今诊断喉癌及喉癌前病变的“金标准”，但这种方法需要特殊设备和专门技术人员操作，检查价格昂贵，经济成本较高，限制了其在人群中的进一步推广使用。此外由于喉癌的病灶所处位置较为特殊，且声音嘶哑、咽喉部异物感、咳嗽、呼吸困难等症状缺乏特异性，喉镜下取组织活检又容易损伤周边的声带等组织，难以作为喉癌人群的初筛手段在大规模人群中应用。因此，lc的筛查和早期诊断成为当前研究领域急待解决的焦点问题，建立简易、非侵入性和高灵敏的检测方法，从而降低lc病人的死亡率已成为迫切的需求。
2、生物标志物是由于肿瘤异常或者肿瘤刺激宿主产生的一类物质，对评估肿瘤的发生、发展以及预后具有重要的参考意义。角化素蛋白片段19(cyfra21-1)是细胞角蛋白19的可溶性片断，在上皮组织或细胞溶解或癌变坏死脱落时，大量的cyfra21-1以溶解片段的形式被释放进入血液循环，导致cyfra21-1含量异常升高。研究表明，头颈鳞癌患者血清cyfra21-1含量增高，与肿瘤分期、淋巴结转移呈正相关。目前，酶联免疫吸附剂测
3、因此，亟需开发一种操作操作简单、灵敏度高、特异性的检测新方法。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术目的之一在于提供一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，该检测试剂是通过多肽-dna偶联探针将核酸信号放大技术催化发夹自组装(cha)策略引入蛋白类标志物检测制得检测试剂，具有灵敏度高和特异性强的特点。
2、为了达到上述目的，本专利技术可以采用以下技术方案：
3、本专利技术一方面提供一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，其包括sers探针、捕获探针和多肽-dna偶联探针；sers探针的制备方法包括：将4-mba标记金纳米双锥修饰上活化后的hpdna1得到sers探针；捕获探针的制备方法包括：将活化后的mbs表面修饰上活化的hpdna2得到捕获探针；多肽-dna偶联探针的制备方法包括：将dna1和dna2分别修饰到ab1和ab2表面得到多肽-dna偶联探针。
4、本专利技术另一方面提供一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的sers传感器，其包括上述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂。
5、本专利技术再一方面提供一种用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂盒，包括上述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂。
6、本专利技术再一方面提供一种上述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂在制备用于检测喉癌标志物cyfra21-1的试剂或试剂盒中的应用。
7、本专利技术再提供一种检测喉癌标志物cyfra21-1的方法，包括：使用上述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂或上述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的sers传感器或上述用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂盒进行检测。
8、本专利技术有益效果至少包括：
9、(1)本专利技术通过多肽-dna偶联探针将核酸信号放大技术cha策略引入蛋白类标志物检测，为蛋白类标志物检测提供了新思路；
10、(2)本专利技术以gnbps作为sers活性介质，加之磁球富集分离策略，可提供丰富的“热点”，从而实现sers信号的显著放大；
11、(3)本专利技术相比现有的蛋白类标志物检测技术，具有更低的检出限，其中cyfra21-1的检出限低至0.76pg/ml。
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1.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂，其特征在于，包括SERS探针、捕获探针和多肽-DNA偶联探针；SERS探针的制备方法包括：将4-MBA标记金纳米双锥修饰上活化后的hpDNA1得到SERS探针；捕获探针的制备方法包括：将活化后的MBs表面修饰上活化的hpDNA2得到捕获探针；多肽-DNA偶联探针的制备方法包括：将DNA1和DNA2分别修饰到Ab1和Ab2表面得到多肽-DNA偶联探针。
2.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂，其特征在于，SERS探针的制备方法包括：将GNBPs溶液和4-MBA溶液孵育，离心和纯化得4-MBA修饰GNBPs溶液；将hpDNA1溶液使用三(2-羧乙基)膦缓冲液活化得活化hpDNA1溶液；将4-MBA修饰GNBPs溶液和活化hpDNA1溶液混合孵育，纯化得SERS探针。
3.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂，其特征在于，捕获探针的制备方法包括：将MBs溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合孵育得到MBs表面
4.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂，其特征在于，多肽-DNA偶联探针的制备方法包括：将Ab1和Ab2溶液与(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯的磷酸缓冲盐溶液反应得混合液a；硫代寡链核苷酸DNA1和DNA2与二硫苏糖醇在磷酸缓冲盐溶液中孵育得混合液b；将混合液a和混合液b纯化得多肽-DNA偶联探针。
5.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器，其特征在于，包括权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
6.用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂。
7.权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂在制备用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的试剂或试剂盒中的应用。
8.一种检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法，其特征在于，使用权利要求1至4中任一项权利要求所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂或权利要求5所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的SERS传感器或权利要求6所述的用于检测喉癌标志物CYFRA21-1的检测试剂盒进行检测。
9.根据权利要求8所述的检测喉癌标志物CYFRA21-1的方法，其特征在于，将待血清样本与多肽-DNA偶联探针混合孵育，随后加入SERS探针和捕获探针共同孵育制得复合物；将复合物进行拉曼测试，根据拉曼测试结果检测喉癌标志物CYFRA21-1。
...【技术特征摘要】
1.用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，其特征在于，包括sers探针、捕获探针和多肽-dna偶联探针；sers探针的制备方法包括：将4-mba标记金纳米双锥修饰上活化后的hpdna1得到sers探针；捕获探针的制备方法包括：将活化后的mbs表面修饰上活化的hpdna2得到捕获探针；多肽-dna偶联探针的制备方法包括：将dna1和dna2分别修饰到ab1和ab2表面得到多肽-dna偶联探针。
2.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，其特征在于，sers探针的制备方法包括：将gnbps溶液和4-mba溶液孵育，离心和纯化得4-mba修饰gnbps溶液；将hpdna1溶液使用三(2-羧乙基)膦缓冲液活化得活化hpdna1溶液；将4-mba修饰gnbps溶液和活化hpdna1溶液混合孵育，纯化得sers探针。
3.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，其特征在于，捕获探针的制备方法包括：将mbs溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和n-羟基琥珀酰亚胺溶液混合孵育得到mbs表面活化溶液；将活化hpdna2溶液与mbs表面活化溶液混合孵育，分离，洗涤得捕获探针。
4.根据权利要求1所述的用于检测喉癌标志物cyfra21-1的检测试剂，其特征在于，多肽-dna偶联探针的制备方法包括：将ab1和ab2溶液与(n-马来酰亚胺甲基)...
【专利技术属性】
技术研发人员：李广，孙爱东，包晓涛，
申请(专利权)人：扬州大学附属医院扬州市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：
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