【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的领域是血液制品免疫球蛋白g的制备，特别是利用亲和层析法。
技术介绍
1、背景描述包括可能有助于理解本专利技术的信息。这里提供的任何信息都不是承认为现有技术或与当前要求保护的专利技术相关，或者任何具体或隐含引用的出版物都是现有技术。
2、施用已恢复或正在从感染中恢复的个体的血浆或血清已用于为受感染个体提供短暂的被动免疫。这种被动免疫可以追溯到20世纪初，当时特异性抗体是从接种过疫苗的动物身上获得的血清中提取的。人类血液也被确认为抗体的来源。这种被动免疫通过提供病原体的特异性抗体来提供针对病原体的即时和短期免疫。自引入以来，这种被动免疫已被证明能挽救许多急性感染的生命。虽然抗生素在治疗细菌感染方面已在很大程度上取代了被动免疫，但在没有疫苗或其他特定治疗方法的情况下，被动免疫仍然是治疗许多病毒病原体的重要工具。值得注意的是，人们已探索了这种被动免疫作为埃博拉和冠状病毒感染的治疗方法。
3、恢复期血液制品通常通过从先前感染的个体采集全血或血浆来获得，该个体已对引起所讨论疾病的病原体产生了有效的体液免疫，并可提供特异性人类抗体源。输注这种恢复期血液制品可以有效地中和病原体，并有助于将其从循环中清除。不同的恢复期或高免疫性血液制品被用于提供这种被动免疫，包括恢复期全血、恢复期血浆和恢复期血清。
4、恢复期血浆已成为越来越受关注的对象，例如在治疗sars和相关冠状病毒方面。目前，通过采血获得的血浆是首选的，因为每次采血可以收集更多的血浆，更频繁的献血是可能的，而且事实上对献血者的血红蛋白水平几乎
5、因此，人们对从恢复期或超免疫源获得的血液制品中分离免疫球蛋白(通常是igg)，随后向患者施用相对纯(例如大于95％)的免疫球蛋白越来越感兴趣。这种方法可以提供所需的被动免疫，同时避免因引入其他血液制品成分而引起的并发症。此外，如此分离的igg可以在使用前冻干和重悬，简化了储存和分配。
6、使用分离的高免疫性免疫球蛋白的另一个好处是，相对于高免疫性血浆输注，能够使用较小的体积。治疗性血浆的施用不可避免地受到血浆体积的限制(除非患者血浆被去除，即血浆置换)。施用血浆是一个涉及医学的过程，特别是在使用血浆置换的情况下，这有效地限制了可以施用的igg剂量。相比之下，由于其浓度，分离的超免疫抗体的施用不受此方式的限制。由此产生的小体积使得施用比通过输注超免疫血清可获得的更高剂量治疗性igg安全和方便。
7、不幸的是，从血液制品中以所需纯度分离igg是一个复杂的过程。典型的方法包括几个沉淀步骤，在此期间igg可能丢失，并且可能包括不适合大规模生产的步骤。例如，亲和层析(例如，使用蛋白a或蛋白g亲和介质)是在有限数量的步骤中提供高纯度igg的有吸引力的方法。不幸的是，这种亲和介质的层析柱容易被脂类、非igg血液蛋白等污染。这种污染大大降低了昂贵亲和介质的容量，并且可能需要较长的柱清洗步骤，随着时间的推移会降低性能，并缩短这种昂贵介质的使用周期。因此，目前使用这种igg特异性亲和层析的方法通常包括在引入亲和介质之前对血液制品进行冗长而复杂的处理，这限制了其应用。
8、因此，当亲和层析用于分离血液蛋白时，仍需要简化和精简(streamline)上游处理步骤的组合物和方法。
技术实现思路
1、本专利技术主题提供了简化应用于层析介质的血液制品制备的设备、系统和方法。将二氧化硅颗粒或粉末与有机盐(例如，柠檬酸盐或乙酸盐)一起添加到血液制品中，形成沉淀和上清液部分。上清液部分可直接应用于层析分离步骤，无需额外处理或仅少量处理。
2、本专利技术构思的一个实施方案是一种通过使血液制品与脂质/脂蛋白吸附材料(例如细碎二氧化硅(例如，气相二氧化硅)和/或其他亲脂性和/或惰性蛋白质吸附材料(如，带电二氧化硅、木炭、活性炭、al(oh)3、膨润土、磷酸钙/羟基磷灰石)，同时将血液制品与有机盐混合，其浓度可产生第一沉淀和第一上清液。细碎二氧化硅和有机盐可以按任何顺序或同时加入。将第一上清液应用于分离柱，并从分离柱中收集包含目标蛋白(例如，igg)的部分。在一些实施方案中，可以从分离柱的流穿级分回收额外的蛋白质(例如非igg蛋白质)。合适的分离柱可以包括亲和介质、阴离子交换介质、阳离子交换介质、疏水相互作用介质、染料亲和介质，混合模式介质和/或尺寸排阻介质。
3、所用有机盐的浓度足以从血液制品中沉淀第一种非目标蛋白(例如，非igg蛋白)，例如以重量计约5％至约20％。第一沉淀包括细碎二氧化硅和非目标蛋白。在一些实施方案中，将第一沉淀重悬或再溶解以产生包含第一非igg蛋白的第二溶液。该第二溶液可以从细碎二氧化硅中分离出来，并进一步加工以从第二溶液中回收非目标蛋白。
4、另一实施方案是一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，所述分离是通过使血液制品与细碎二氧化硅(例如，气相二氧化硅)接触，而血液制品与有机盐(如柠檬酸盐或乙酸盐)以产生第一沉淀(其可包括细碎二氧化硅和非目标蛋白以及第一上清液)的浓度组合。在一些实施方案中，在添加细碎二氧化硅之前，将有机盐添加到血液制品中。该第一浓度的有机盐足以从血液制品中沉淀非目标蛋白(例如以重量计约5％至约15％)。将额外量的有机盐添加到第一上清液中以提供产生第二沉淀和第二上清液的第二浓度有机盐。在一些实施方案中，从该第二上清液中分离非目标蛋白。将第二沉淀重悬或再溶解以产生再溶解的第二沉淀，该第二沉淀又被施加到分离柱。这种分离柱可以包括亲和介质、阴离子交换介质、阳离子交换介质、疏水相互作用介质、染料亲和介质、混合模式介质和/或尺寸排阻介质。然后从分离柱中收集含目标蛋白(例如igg)的级分。在一些实施方案中，从分离柱收集流穿级分并进一步处理以分离非目标蛋白。
5、这些实施方案中的一些包括重新悬浮第一沉淀以产生包含非目标蛋白的第二溶液，并将第二溶液与细碎二氧化硅分离。随后可从第二溶液中回收非目标蛋白。
6、本专利技术构思的另一个实施方案是一种从血液制品分离目标蛋白(例如，igg)的方法，所述分离是通过使血液制品与第一浓度的有机盐(例如，柠檬酸盐或乙酸盐)接触(其足以从血液制品中沉淀非目标蛋白，例如，以重量计约5％至约15％)来沉淀(其可包括非目标蛋白)和第一上清液，然后向第一上清物中加入细碎二氧化硅(例如，气相二氧化硅)和额外量的有机盐，以提供第二浓度的有机盐。细碎二氧化硅可以是在向血液制品中加入有机盐之后或基本上同时加入。这产生第二沉淀(其包括目标蛋白(例如igg)和细碎二氧本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，包括：
2.根据权利要求1的方法，其中所述有机盐是柠檬酸盐或乙酸盐。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述浓度为以重量计5％至20％。
4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒是气相二氧化硅。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀包括所述脂质或脂蛋白吸附颗粒和所述第一非目标蛋白。
6.根据权利要求5所述的方法，包括重新悬浮所述第一沉淀以产生包含所述第一非目标蛋白的第二溶液，并将所述第二溶液与所述脂质或脂蛋白吸附颗粒分离。
7.根据权利要求6的方法，包括从第二溶液中回收第一非目标蛋白。
8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒基本上与所述有机盐同时添加到所述血液制品中。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在添加脂质或脂蛋白吸附颗粒之前，将有机盐添加到血液制品中。
10.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中所述层析介质结合所述目标蛋白，包括从包
11.根据权利要求10所述的方法，包括从所述层析介质中收集流穿级分，并任选地从所述流穿级分中分离第二非目标蛋白。
12.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中所述层析介质不结合所述目标蛋白，包括从所述层析中收集包含所述目标蛋白的流穿级分。
13.根据权利要求12所述的方法，包括洗脱所述层析介质以产生洗脱的级分，并任选地从洗脱的组分中分离第二非目标蛋白。
14.根据权利要求1至13任一项所述的方法，其中所述分离柱包括层析介质，所述层析介质选自亲和介质、阴离子交换介质、阳离子交换介质、疏水相互作用介质、染料亲和介质、混合模式介质和尺寸排阻介质。
15.根据权利要求1至14任一项所述的方法，其中所述目标蛋白是免疫球蛋白G(IgG)。
16.一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，包括：
17.根据权利要求16的方法，其中所述有机盐是柠檬酸盐或乙酸盐。
18.根据权利要求16或17的方法，其中所述第一浓度为以重量计5％至15％。
19.根据权利要求16至18任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒是气相二氧化硅。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀包括所述脂质或脂蛋白吸附颗粒和所述非目标蛋白的蛋白。
21.根据权利要求20所述的方法，包括重新悬浮所述第一沉淀以产生包含所述第一非目标蛋白的第二溶液，并将所述第二溶液与所述脂质或脂蛋白吸附颗粒分离。
22.根据权利要求21所述的方法，包括从所述第二溶液中回收所述第一非目标蛋白。
23.根据权利要求16至22任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒基本上与所述有机盐同时添加到所述血液制品中。
24.根据权利要求16至22中任一项所述的方法，其中在添加脂质或脂蛋白吸附颗粒之前，将有机盐添加到血液制品中。
25.根据权利要求16至24中任一项所述的方法，其中所述层析介质结合所述目标蛋白，并且其中所述流出物是来自包含所述目标蛋白的层析介质的洗脱液。
26.根据权利要求25所述的方法，包括从所述层析介质中收集流穿级分，并任选地从所述流穿级分中分离第二非目标蛋白。
27.根据权利要求16至24中任一项所述的方法，其中所述层析介质不结合所述目标蛋白，并且其中所述流出物是来自所述层析介质的包含所述目标蛋白的流穿级分。
28.根据权利要求27所述的方法，包括洗脱所述层析介质以产生洗脱的级分，并任选地从洗脱的组分中分离第二非目标蛋白。
29.根据权利要求16至28任一项所述的方法，包括从第二上清液中分离第三非目标蛋白。
30.根据权利要求16至29任一项所述的方法，其中所述分离柱包括层析介质，所述层析介质选自亲和介质、阴离子交换介质、阳离子交换介质、疏水相互作用介质、染料亲和介质、混合模式介质和尺寸排阻介质。
31.根据权利要求16至30中任一项所述的方法，其中所述目标蛋白是IgG。
32.一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，包括：
33.根据权利要求32的方法，其中所述有机盐是柠檬酸盐或乙酸盐。
34.根据权利要求32或33的方法，其中所述第一浓度为以重量计5％至15％。
35.根据权利要求32至34任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒是气相二氧...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，包括：
2.根据权利要求1的方法，其中所述有机盐是柠檬酸盐或乙酸盐。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述浓度为以重量计5％至20％。
4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒是气相二氧化硅。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀包括所述脂质或脂蛋白吸附颗粒和所述第一非目标蛋白。
6.根据权利要求5所述的方法，包括重新悬浮所述第一沉淀以产生包含所述第一非目标蛋白的第二溶液，并将所述第二溶液与所述脂质或脂蛋白吸附颗粒分离。
7.根据权利要求6的方法，包括从第二溶液中回收第一非目标蛋白。
8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒基本上与所述有机盐同时添加到所述血液制品中。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在添加脂质或脂蛋白吸附颗粒之前，将有机盐添加到血液制品中。
10.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中所述层析介质结合所述目标蛋白，包括从包含所述目标蛋白的层析介质收集洗脱液。
11.根据权利要求10所述的方法，包括从所述层析介质中收集流穿级分，并任选地从所述流穿级分中分离第二非目标蛋白。
12.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中所述层析介质不结合所述目标蛋白，包括从所述层析中收集包含所述目标蛋白的流穿级分。
13.根据权利要求12所述的方法，包括洗脱所述层析介质以产生洗脱的级分，并任选地从洗脱的组分中分离第二非目标蛋白。
14.根据权利要求1至13任一项所述的方法，其中所述分离柱包括层析介质，所述层析介质选自亲和介质、阴离子交换介质、阳离子交换介质、疏水相互作用介质、染料亲和介质、混合模式介质和尺寸排阻介质。
15.根据权利要求1至14任一项所述的方法，其中所述目标蛋白是免疫球蛋白g(igg)。
16.一种从血液制品中分离目标蛋白的方法，包括：
17.根据权利要求16的方法，其中所述有机盐是柠檬酸盐或乙酸盐。
18.根据权利要求16或17的方法，其中所述第一浓度为以重量计5％至15％。
19.根据权利要求16至18任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒是气相二氧化硅。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀包括所述脂质或脂蛋白吸附颗粒和所述非目标蛋白的蛋白。
21.根据权利要求20所述的方法，包括重新悬浮所述第一沉淀以产生包含所述第一非目标蛋白的第二溶液，并将所述第二溶液与所述脂质或脂蛋白吸附颗粒分离。
22.根据权利要求21所述的方法，包括从所述第二溶液中回收所述第一非目标蛋白。
23.根据权利要求16至22任一项所述的方法，其中所述脂质或脂蛋白吸附颗粒基本上与所述有机盐同时添加到所述血液制品中。
24.根据权利要求16至22中任一项所述的方法，其中在添加脂质或脂蛋白吸附颗粒之前，将有机盐添加到血液制品中。
25.根据权利要求16至24中任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：尤金·祖尔罗，克劳斯·彼得·拉德克，丹尼斯·科廷，库尔特·L·布里尔哈特，
申请(专利权)人：等离子体技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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