确定靶多核苷酸的方法和试剂盒，以及探针组技术

一种用于确定在包括额外组分的样品中两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量的方法，所述方法包括：(i)使所述样品与两个或更多个探针的组在适于所述靶多核苷酸与所述探针杂交的条件下接触；(ii)使步骤(i)中制备的所述样品与跨膜孔接触，单链多核苷酸但不是双链多核苷酸可以穿过所述跨膜孔，并且对所述跨膜孔施加电位差，使得所述样品中的所述杂交探针与所述孔相互作用；(iii)测量具有限定窗口内的持续时间的电流阻塞；以及(iv)将所述测量的电流阻塞与所述探针相关联，从而确定所述样品中所述两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及确定样品中靶多核苷酸的存在、不存在或量的方法。本专利技术还涉及用于所述方法中的探针组和用于进行所述方法的试剂盒。

技术介绍

1、跨膜孔(纳米孔)作为直接电子生物传感器具有很大的潜力，用于各种分析物，如聚合物和小分子。当跨纳米孔施加电位时，当如多核苷酸等分子瞬时驻留在纳米孔的桶或通道中一段时间时，电流发生变化。特定分子，如特定多核苷酸，给出已知特征和持续时间的电流变化。这种电流变化可以用于识别孔中存在的多核苷酸。

2、跨膜孔可以用于多重测定中以确定一组两种或更多种分析物中每种分析物的存在或不存在。多重测定使用探针组。组中的每个探针包含尾部，所述尾部能够进入孔并影响流过孔的电流和分析物结合区域。每个尾部以不同且独特的方式影响流过孔的电流，这取决于探针是否与感兴趣分析物中的一种结合。组中每个探针对流过孔的电流的影响也是不同的，因此可以检测每个探针的特性。

技术实现思路

1、专利技术人已经开发了用于使用跨膜孔确定一个或多个靶多核苷酸的存在、不存在、或浓度/量的测定。测定使用探针组，每个探针包本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于确定在包括额外组分的样品中两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组中至少两个探针的所述非杂交区域彼此不同，并且所述方法包括单独确定与所述至少两个探针中的每一个杂交的所述靶多核苷酸的存在或不存在。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述组中每一个探针包括唯一非杂交区域。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非天然核苷酸包括(ⅰ)经修饰的糖，任选地，其中所述经修饰的糖是2'O-甲基核糖；和/或(ⅱ)经修饰的核碱基。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述非天...

【技术特征摘要】

1.一种用于确定在包括额外组分的样品中两个或更多个靶多核苷酸的存在、不存在或量的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组中至少两个探针的所述非杂交区域彼此不同，并且所述方法包括单独确定与所述至少两个探针中的每一个杂交的所述靶多核苷酸的存在或不存在。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述组中每一个探针包括唯一非杂交区域。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非天然核苷酸包括(ⅰ)经修饰的糖，任选地，其中所述经修饰的糖是2'o-甲基核糖；和/或(ⅱ)经修饰的核碱基。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述非天然核苷酸是肽核酸、锁核酸、解锁核酸、桥接核酸(bna)或吗啉代。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述杂交区域中的至少一个包括zxny和/或nyzx中的一个或多个实例，其中z是非天然核苷酸，并且n是与所述靶多核苷酸中的所述核苷酸中的一个互补的天然核苷酸，x是1、2、3、4或5，并且y是1、2、3、4或5。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述探针中的至少一个中，所述非杂交区域是所述杂交区域的5'；和/或其中在所述探针中的至少一个中，所述杂交区域位于所述探针的3'末端处。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述探针进一步包括第二非杂交区域，以及第二杂交区域、四链体序列或双链区域，其中所述第一和第二非杂交区域由所述第一或第二杂交区域、所述四链体序列或所述双链区域隔开。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非杂交区域包括聚合物；任选地，其中所述聚合物是多核苷酸、多肽、聚乙二醇(peg)或多糖。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉斯·安东尼·史密斯，丹尼尔·约翰·特纳，丹尼尔·乔治·福德姆，詹姆斯·怀特，
申请(专利权)人：牛津纳米孔科技公开有限公司，
类型：发明
国别省市：