一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法技术

一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，包括步骤一，胎盘收集预处理；步骤二，剥离蜕膜并清洗；步骤三，一次酶解消化；步骤四，一次离心；步骤五，二次酶解消化；步骤六，二次离心；步骤七，接种培养；所述步骤四中，离心机的运转速度设置为1000r/min，离心持续时间为5min；所述步骤五中，二次酶解使用1g/L的胶原酶进行消化，酶解消化时间为60min；本发明专利技术通过胰蛋白酶和胶原酶的二次酶解方案，使得胎盘蜕膜干细胞的提取效率大大提高，通过在酶解过程中添加培养液，提供更加合适的酶解环境，使得提取的干细胞活性较高，另外通过二次离心方案，避免了在多次离心过程中损伤蜕膜干细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体为一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法。

技术介绍

1、胎盘蜕膜干细胞是人体微环境的重要组成部分,移植间充质干细胞可以改变造血微环境，重建免疫系统，促进造血功能恢复，与造血干细胞一起移植能显著提高白血病和难治性贫血等的治疗效果，胎盘蜕膜干细胞基因型与母亲完全相同,是母亲及其母系亲属的专属干细胞,应用在美容、抗衰老、产后恢复、妇女疾病等方面具有显著效果。

2、现有的胎盘蜕膜干细胞提取方法存在以下缺陷，一是提取的干细胞活性较低，对后续的分离提纯要求较高，二是提取的干细胞数量较少，提取效率较低，三是现有的提取方法在提取过程中需要进行三次以上的离心分离，容易在离心过程中对干细胞产生损伤。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，包括步骤一，胎盘收集预处理；步骤二，剥离蜕膜并清洗；步骤三，一次酶解消化；步骤四，一次离心；步本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，包括步骤一，胎盘收集预处理；步骤二，剥离蜕膜并清洗；步骤三，一次酶解消化；步骤四，一次离心；步骤五，二次酶解消化；步骤六，二次离心；步骤七，接种培养；其特征在于：

2.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤一中，保存液为含99％低糖DMEM和1％双抗的组织保护液。

3.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤二中，使用的清洗液为0～4℃的无钙镁PBS，进行冲洗两到三次，将蜕膜组织剪成1mm左右的碎块，再次使用无钙镁PBS漂洗至无色。>

4.根据权利...

【技术特征摘要】

1.一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，包括步骤一，胎盘收集预处理；步骤二，剥离蜕膜并清洗；步骤三，一次酶解消化；步骤四，一次离心；步骤五，二次酶解消化；步骤六，二次离心；步骤七，接种培养；其特征在于：

2.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤一中，保存液为含99％低糖dmem和1％双抗的组织保护液。

3.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤二中，使用的清洗液为0～4℃的无钙镁pbs，进行冲洗两到三次，将蜕膜组织剪成1mm左右的碎块，再次使用无钙镁pbs漂洗至无色。

4.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤三中，一次酶解使用2g/l的胰蛋白酶，酶解时间为30min。

5.根据权利要求1所述的一种胎盘分离提取蜕膜干细胞的方法，其特征在于：所述步骤四中，离心机的运转速度设置为1000r/min，离心持续时间为5min。

6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：易科青，罗志勇，方超，
申请(专利权)人：深圳润生元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：