【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微流控，尤其是涉及一种核酸检测方法及微流控芯片。
技术介绍
1、微流控技术可以将生化分析过程中的样品制备、反应、分离等基本操作单元集成到一块芯片上，自动完成分析过程，其具有样品消耗少、检测速度快、操作简便等优点，其经常用于医学领域内的标志物检测工作中，以实现相关疾病的诊断。
2、微流控芯片试剂盒可用于核酸检测，试剂盒内包含有微流控芯片、样品提取液和鼻拭子，利用鼻拭子将样品提取，再放入样品提取液内，将样品提取液与样品混合后形成的混合液，倒入微流控芯片内，由微流控芯片进行检测，一般在检测时，微流控芯片利用实时荧光定量pcr（quantitative real-time pcr）将混合液检测，但在普通的微流控芯片进行检测时，存在有准确性不高，导致检测结构有误等情况。
技术实现思路
1、为了改善上述问题，本申请提供一种核酸检测方法及微流控芯片。
2、本申请提供的一种核酸检测方法及微流控芯片采用如下的技术方案：
3、一种微流控芯核酸检测方法，包括如下步骤：
4、提取样品：利用鼻拭子的拭子头提取检测样品；
5、提取液混合：将所述鼻拭子放入样品提取液管中，折断所述鼻拭子将拭子头留在管内，盖上管盖，挤压所述提取液管，将所述拭子头上的所述样品与提取液混合，形成样品混合液；
6、放样：将微流控芯片放置于检测仪器上，并将所述样品混合液倒入所述微流控芯片入口处；
7、封膜：将入口处封膜，避免所述样品混合液从入口处
8、取对照液：按压泡罩，使所述泡罩中的对照液进入所述微流控芯片内；
9、退火区闭阀:关闭退火区的按压阀，使所述对照液和所述样品混合液无法进入所述退火区，第一输送泵将所述样品混合液和所述对照液输送至混合区，所述混合区设有对照液混合仓和样品混合仓；
10、冻干微球溶解：所述样品混合液和所述对照液位于所述混合区后，所述对照液混合仓与所述样品混合仓内均设置有冻干微球，所述检测仪器对所述混合区加热至50℃-60℃，持续3min，对应的所述冻干微球溶解至所述对照液和所述样品混合液中，分别形成待对照检测液和样品检测液；
11、一次切换按压阀：打开所述退火区的按压阀，关闭变性区的按压阀，所述第一输送泵将各组所述对照检测液和所述样品检测液输送至所述变性区；
12、变性：所述检测仪器对所述变性区加热，使所述变性区加热至变性所需温度，持续5s，所述对照检测液和所述样品检测液中的双链dna模板在热作用下，氢键断裂，形成两条单链dna；
13、二次切换按压阀：关闭所述退火区的按压阀，打开所述变性区的按压阀，所述第二输送泵将所述对照检测液和所述样品检测液输送回所述退火区；
14、退火：将所述对照检测液和所述样品检测液回到所述退火区后，所述退火区的温度低于变性区，持续停滞持续30s，使所述对照检测液和所述样品检测液冷却；
15、三次切换按压阀：打开所述退火区的按压阀，关闭所述变性区的按压阀，使所述第一输送泵能够将各组所述对照检测液和所述样品检测液送回所述变性区；
16、延伸：重复一次切换按压阀步骤，使所述对照检测液和所述样品检测液回到所述变性区，所述对照检测液和所述样品检测液逐渐升温至所述变性区温度，升温过程达到延伸所需温度时，发生延伸反应，以促进taqdna聚合酶合成新的dna，taqdna聚合酶通过向模板添加dna碱基来促进新dna的合成；
17、拷贝：重复步骤一次切换按压阀至步骤延伸50 次，每重复一次dna含量增加一倍：
18、四次切换按压阀：关闭所述检测区的按压阀，打开所述退火区的按压阀和所述变性区的按压阀，所述第一输送泵输送各组所述对照检测液和所述样品检测液至所述检测区，所述检测区分为相隔的对照检测仓和样品检测仓；
19、判读：根据荧光判读各组所述对照检测仓和所述样品检测仓内的检测结果，并利用所述对照液检测仓与样品检测仓的检测结果对比。
20、通过采用上述技术方案，在加热区间稳定使dna稳定扩增的情况下，通过设置阴性的对照液与样品一同进行反应和检测，提高检测结果的准确性，减少误诊误判的概率。
21、可选的，所述退火区加热温度区间为50℃-60℃。
22、通过采用上述技术方案，退火区加热温度区间在50℃-60℃时，使检测液冷却能够稳定冷却至50℃-60℃的区间内，避免降温过低或过高导致dna链不稳等情况。
23、可选的，所述变性区加热温度区间为90℃-96℃。
24、通过采用上述技术方案，90℃-96℃能够让dna双链中的氢键稳定断裂，形成两条单链dna，保证变性的充分完全。
25、一种微流控芯片，所述微流控芯片需要配合提供加热和荧光判读的所述检测仪器使用，包括芯片主体、泡罩、冻干微球、第一输送泵、第二输送泵、第一按压阀、第二按压阀和第三按压阀；芯片主体上开设有对照通道、样品通道、检测仓、混合仓、进样口以及若干气孔；
26、所述芯片主体分为进样区、混合区、退火区、变性区和检测区；所述对照通道和所述样品通道均从进样区贯穿所述混合区、所述退火区、所述变性区至所述检测区；
27、所述泡罩与所述进样口位于进样区内，所述泡罩内存有对照液，且所述泡罩与所述对照通道连通；所述样品通道与所述进样口连通；所述混合仓位于所述混合区内，可溶解的所述冻干微球位于所述混合仓内，且所述混合仓数量至少设置有两个；所述检测仓位于检测区内，所述检测仓数量至少设置有两个；
28、所述第一输送泵和所述第二输送泵均设置于所述芯片主体外；所述第一输送泵和所述第二输送泵均与所述对照通道和所述样品通道连通；
29、所述第一按压阀、所述第二按压阀和所述第三按压阀均设置于所述对照通道和所述样品通道的路径上，并且设置点的路径前后均设置有气孔；所述第一按压阀位于所述混合区与所述退火区之间；所述第二按压阀位于所述检测仓与所述变性区之间；所述第三按压阀位于所述检测仓远离所述第二按压阀一端。
30、通过采用上述技术方案，将样品混合液从进样口放入样品通道内，泡罩内的对照液进入对照通道内，第一输送泵驱使对照液和样品混合液进入混合区内的混合仓中，检测仪器对混合区进行加热，使混合仓内的冻干微球溶解至对照液和样品混合液中，形成不同组的检测液，通过第一输送泵和第二输送泵的驱动，以及第一按压阀、第二按压阀和第三按压阀的启闭，使检测液反复在退火区和变性区之间流动，实现dna的复制扩增，保证检测时dna含量足够，提高检测结果的稳定，当检测液输送至检测仓时，通过检测仪器的荧光判读即可得到检测结果，在dna稳定扩增的情况下，通过设置阴性的对照液与样品一同进行反应和检测，提高检测结果的准确性，减少误诊误判的概率。
31、可选的，所述第一输送泵通过所述连接通道与所述进样口和所述对照通道连通，所述第二输送泵与所述第三按压阀一端的所述对照通道和所述样本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸检测方法，其特征在于，所述退火区加热温度区间为50℃-60℃。
3.根据权利要求1所述的一种核酸检测方法，其特征在于，所述变性区加热温度区间为90℃-96℃。
4.一种微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片需要配合提供加热和荧光判读的所述检测仪器使用，包括芯片主体（1）、泡罩（2）、冻干微球（8）、第一输送泵（3）、第二输送泵（4）、第一按压阀（5）、第二按压阀（6）和第三按压阀（7）；芯片主体（1）上开设有对照通道（11）、样品通道（12）、检测仓（13）、混合仓（14）、进样口（15）以及若干气孔（16）；
5.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述第一输送泵（3）通过所述连接通道与所述进样口（15）和所述对照通道（11）连通，所述第二输送泵（4）与所述第三按压阀（7）一端的所述对照通道（11）和所述样品通道（12）连通。
6.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述气孔（16）上设置有透气膜。
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8.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述样品通道（12）数量至少设置一条。
9.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述混合仓（14）位于所述退火区内，所述第一按压阀（5）位于所述混合仓（14）连接的所述对照液通道和所述样品通道（12）后。
10.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述第一按压阀（5）、所述第二按压阀（6）和所述第三按压阀（7）同步控制所述对照通道（11）和所述样品通道（12）的启闭。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种核酸检测方法，其特征在于，所述退火区加热温度区间为50℃-60℃。
3.根据权利要求1所述的一种核酸检测方法，其特征在于，所述变性区加热温度区间为90℃-96℃。
4.一种微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片需要配合提供加热和荧光判读的所述检测仪器使用，包括芯片主体（1）、泡罩（2）、冻干微球（8）、第一输送泵（3）、第二输送泵（4）、第一按压阀（5）、第二按压阀（6）和第三按压阀（7）；芯片主体（1）上开设有对照通道（11）、样品通道（12）、检测仓（13）、混合仓（14）、进样口（15）以及若干气孔（16）；
5.根据权利要求4所述的一种微流控芯片，其特征在于，所述第一输送泵（3）通过所述连接通道与所述进样口（15）和所述对照通道（11）连通，所述第二输送泵（4）与所述第...
【专利技术属性】
技术研发人员：张书萌，龙梅，刘峰，林志铿，
申请(专利权)人：厦门为正生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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