【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，涉及细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、聚乙二醇化促红细胞生成素(peg-epo)，又称聚乙二醇重组人促红素，是一种蛋白质类的生物药。人体摄入生物药时，基于药物免疫原性的强弱,机体会产生不同程度的免疫应答，从而导致抗药抗体的产生。抗药抗体中有一类抗体为中和抗体，这种抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合，或者通过空间位阻的作用，使药物失去与其靶点结合的能力，从而封闭、中和药物的治疗活性，影响药物的吸收，会影响生物药物在人体内的药物代谢动力学、药效动力学、生物利用度、治疗效果及安全性。专利技术人研究发现，人体摄入peg-epo后，会产生抗peg-epo的中和抗体，从而使peg-epo失去与靶点结合的能力，影响peg-epo的治疗活性。因此需要一种抗peg-epo的中和抗体的检测方法。
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，本专利技术提供的方法具有较高的灵敏度、精密度以及稳定性，能够实现人血清样品中抗peg-epo的中和抗体的检测。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
3、一方面，一种细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，将待测血清样品
4、其中，细胞悬液中含有hek293/stat5-re-luc/epor细胞，所述hek293/stat5-re-luc/epor细胞为同时导入stat5-re-luc基因和epor基因的hek293细胞。
5、本专利技术为了实现细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体，设计了hek293/stat5-re-luc/epor细胞，其中，epor基因能够表达红细胞生成素受体，stat5-re-luc基因能够表达荧光素酶；该细胞在血清中能够通过红细胞生成素受体与peg-epo结合，结合后能够激活下游荧光素酶的表达，当待测血清样品中存在抗peg-epo的中和抗体时，会干扰peg-epo与细胞的结合，从而减少荧光素酶的表达量；中和抗体含量越高，荧光素酶的信号值越低；通过荧光素酶的信号值检测，从而实现对人血清中抗peg-epo的中和抗体的检测。
6、另一方面，一种细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的检测试剂盒，包括：
7、hek293/stat5-re-luc/epor细胞，其为同时导入stat5-re-luc基因和epor基因的hek293细胞；
8、培养基，用于培养hek293/stat5-re-luc/epor细胞，并将培养后的细胞制成细胞悬液；
9、peg-epo，用于与待测样品孵育后，再进一步与细胞悬液孵育，然后进行荧光素酶的表达量进行检测。
10、本专利技术的有益效果为：
11、本专利技术设计的hek293/stat5-re-luc/epor细胞，能够在细胞表面表达epor受体，该epor受体能够与人血清样品中的peg-epo结合，结合后能够激活下游荧光素酶的表达，抗peg-epo的中和抗体能够干扰peg-epo与epor受体的结合，从而抑制荧光素酶的表达，由此通过检测荧光素酶的表达量实现对抗peg-epo的中和抗体的检测。
12、经过方法学验证，本专利技术提供的方法在健康人血清中稳健性较高，不存在基质效应、细胞代数稳定、药物耐受度较好、温度稳定性和冻融稳定性好较好，具有良好的应用前景。
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1.一种细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的方法，其特征是，将待测血清样品与PEG-EPO混合，进行一次孵育，获得样品混合液；将样品混合液加入至细胞悬液中进行二次孵育获得底物溶液；对底物溶液中的荧光素酶的表达量进行检测；
2.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的方法，其特征是，采用培养基配制PEG-EPO工作液，将待测血清样品与PEG-EPO工作液混合；优选地，配制PEG-EPO工作液的培养基为DMEM与FBS按照体积比为98.5～99.5:1.5～0.5的比例配制获得。
3.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的方法，其特征是，配制细胞悬液的培养基为DMEM与FBS按照体积比为98.5～99.5:1.5～0.5的比例配制获得；
4.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的方法，其特征是，HEK293/STAT5-RE-Luc/EPOR细胞采用PBS洗涤，然后采用TrypLE Express消化细胞。
5.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗P
6.一种细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的检测试剂盒，其特征是，包括：
7.如权利要求6所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的检测试剂盒，其特征是，包括培养基，所述培养基为DMEM与FBS按照体积比为98.5～99.5:1.5～0.5的比例配制获得。
8.如权利要求6所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的检测试剂盒，其特征是，包括PBS缓冲液。
9.如权利要求6所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的检测试剂盒，其特征是，包括TrypLE Express。
10.如权利要求6所述的细胞法检测人血清中抗PEG-EPO的中和抗体的检测试剂盒，其特征是，包括Bio-GloTM Luciferase Assay System试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，其特征是，将待测血清样品与peg-epo混合，进行一次孵育，获得样品混合液；将样品混合液加入至细胞悬液中进行二次孵育获得底物溶液；对底物溶液中的荧光素酶的表达量进行检测；
2.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，其特征是，采用培养基配制peg-epo工作液，将待测血清样品与peg-epo工作液混合；优选地，配制peg-epo工作液的培养基为dmem与fbs按照体积比为98.5～99.5:1.5～0.5的比例配制获得。
3.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，其特征是，配制细胞悬液的培养基为dmem与fbs按照体积比为98.5～99.5:1.5～0.5的比例配制获得；
4.如权利要求1所述的细胞法检测人血清中抗peg-epo的中和抗体的方法，其特征是，hek293/stat5-re-luc/epor细胞采用pbs洗涤，然后采用tryple expr...
【专利技术属性】
技术研发人员：解福生，徐丽，胥永标，王菲，刘海峰，郝向慧，庞甲佩，许波，贺新新，
申请(专利权)人：华润昂德生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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