【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鱼类性别鉴定，更具体的说是涉及一种鉴定青龙鱼遗传性别的snp分子标记及其应用。
技术介绍
1、青龙鱼的学名为美丽硬仆骨舌鱼scleropagesformosus其隶属于骨舌鱼目、骨舌鱼科。美丽硬仆骨舌鱼在自然界存在三个自然种群，分别为金龙鱼、红龙鱼和青龙鱼。青龙鱼是一种古老的“活化石”鱼类，同时作为名贵的观赏鱼又具有十分重要的经济价值，其被《濒危野生动植物种国际贸易公约》(cites)附录i列为濒危物种。
2、美丽硬仆骨舌鱼(青龙鱼)两性的外部形态差异不明显，也没有异形性染色体，现除了解剖外，没有准确的性别鉴定方法。即，没有在不伤害鱼的前提下实现性别的准确鉴定的方法。故依靠传统方法无法对其活体准确进行生理性别和遗传性别的判别与鉴定，对该鱼的人工繁殖造成了很大的困扰。
3、综上，如何提供一种能有效区分美丽硬仆骨舌鱼(青龙鱼)雌雄性别的鉴定方法或分子标记是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种鉴定青龙鱼遗传性别的snp分子标记及其应用。通过本专利技术的snp位点能够在不剖解的前提下，通过剪取少量鳍条，提取dna后，利用上游引物f和下游引物r，进行pcr扩增反应，反应完成后进行分析，确定样品基因型，鉴定性别，并且不影响青龙鱼的正常生长、繁殖。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种鉴定青龙鱼传性别的snp分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如seq idno.1所示
4、ccgtcctttatttacagcgtctggtttctgtcccagaagcgcagggtgcgccacggaacgggtcccggtccatc aaaaccctacggacagtttaatgccaccagtgaagctgaaatacaaaaaggaacaaagaaggaatctggtacaggtc aaatatgtgccgtgtgggaaaggtgggtcctgagcctgga[c/t]ttcaagagctccagactagttctgatacgttaca ctatttttacactcctgaattaattgaatggaattttctctctatttaaaacatcgggaaggaatttggcatgttttccggaaatggcctgaaccatttatgataaagacattcgattcaactgcaatgaatgagtttttttttttttttttttttgaggtccatgtggcgaaagcctgtgtggagacacatttccaccagatggcatcatctgaatttgaaattattatagctcactttacagactccgatgcagagatttcccggttctttatgggaatttttagtggccattcaattcacttacgtttatggcatgtacaggagtaattcctcacttgctcttaaactgtgatcttcgattcccctcgagaagaattccaagagcccagcaccgaa，seq id no.1。
5、鉴定上述snp分子标记的引物，包括：
6、上游引物f：ccgtcctttatttacagcgtctg，seq id no.2；
7、下游引物r：ttcggtgctgggctcttgga，seq id no.3。
8、一种用于鉴定青龙鱼遗传性别的试剂盒，包括上述的引物。
9、上述的snp分子标记或上述的引物或上述的试剂盒在青龙鱼遗传性别鉴定中的应用。
10、进一步的，当第192位碱基为c/t杂合时，样品为雌性，为c/c纯合时，样品为雄性。
11、一种青龙鱼遗传性别鉴定的方法，包括如下步骤：
12、(1)提取待测青龙鱼的基因组dna；
13、(2)以待测青龙鱼的基因组dna为模板，利用权利要求2所述引物，进行pcr扩增反应；
14、(3)反应完成后进行分析，确定样品基因型，鉴定性别；
15、当核苷酸序列中第192位碱基为c/t杂合时，样品为雌性，为c/c纯合时，样品为雄性。
16、进一步的，所述步骤(2)中pcr扩增反应的反应体系为40μl，包括2*taq mastermix20μl、上游引物f 2μl、下游引物r 2μl、ddh2o 15μl、基因组dna 1μl。
17、进一步的，所述步骤(2)中pcr扩增反应的反应条件为94℃3min；然后进行35个循环，包括94℃30s，60℃30s，72℃30s；然后72℃保持5min结束。
18、进一步的，所述步骤(3)中确定样品基因型的方法为sanger测序。
19、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：
20、本专利技术能在不剖解的前提下实现青龙鱼的性别鉴定，且借助于包括本专利技术的多种测序方法或测序平台能够实现批量的测序，在此基础上，更有利于应用至青龙鱼的养殖、研究上，从而快速区分青龙鱼的性别，提高鉴别、养殖效率。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鉴定青龙鱼遗传性别的SNP分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述分子标记包括SNP位点，所述SNP位点位于所述分子标记5’端第192位碱基。
2.鉴定权利要求1所述SNP分子标记的引物，其特征在于，包括：
3.一种用于鉴定青龙鱼遗传性别的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物。
4.权利要求1所述的SNP分子标记或权利要求2所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在青龙鱼遗传性别鉴定中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，当第192位碱基为C/T杂合时，样品为雌性，为C/C纯合时，样品为雄性。
6.一种青龙鱼遗传性别鉴定的方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增反应的反应体系为40μl，包括2*Taq MasterMix 20μl、上游引物F 2μl、下游引物R 2μl、ddH2O 15μl、基因组DNA1μl。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中确定样品基因型的方法为Sanger测序。
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定青龙鱼遗传性别的snp分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述分子标记包括snp位点，所述snp位点位于所述分子标记5’端第192位碱基。
2.鉴定权利要求1所述snp分子标记的引物，其特征在于，包括：
3.一种用于鉴定青龙鱼遗传性别的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物。
4.权利要求1所述的snp分子标记或权利要求2所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在青龙鱼遗传性别鉴定中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，当第192位碱基为c/t杂合时，样品为雌性，为c/c纯合时，样品为雄性。
...【专利技术属性】
技术研发人员：刘奕，牟希东，王媛媛，孙金辉，杨叶欣，刘超，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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