【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种从猪肺中提取肝素的方法。
技术介绍
1、肝素是一种葡萄糖胺、l-艾杜糖醛苷、n-乙酰葡萄糖胺和d-葡萄糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，存在于肺、血管壁、肠黏膜等组织中，是一种天然抗凝血物质，具体又包括肝素钠、肝素钙以及低分子肝素等，主要用于防治血栓形成。目前肝素的提取方法包括高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法、过氧化氢分次加入二次氧化法以及酶解法，相比于前两种方法而言，酶解法能够避免肝素结构破坏、环境污染也较小，被广泛利用。
2、书籍：杨元娟.生物药物检测技术供药品生产技术、药品生物技术专业用[m].2017.第195页提及肝素广泛存在于哺乳动物的肝、肺、肾、胸腺、肠粘膜、肌肉和血液中，现主要从牛肺、猪肺或猪小肠粘膜中提取。书籍：曾宪科.农副产品深加工利用100例[m].广东科技出版社,2004.第90页也提及从猪肺提取肝素，具体包括水解、沉淀、精制等操作。
3、专利cn104530262a公开了一种从猪肺中提取肝素的生产方法，具体将新鲜猪肺绞碎成浆液、浆液保温酶解、酶解液过滤收集滤液、对滤液进行除蛋白处理、超滤、氧化沉淀、冷冻干燥得肝素粗品。该专利技术具有以下优点：采用的酶解方法能更彻底全面地溶解猪肺浆液，用胰蛋白酶终止酶解，真空冷冻干燥技术稳定了产品的质量以及提高收率，同时获得的粗品杂质少、效价高；生产方法中采用澄清剂来替代乙醇反复醇沉来去除蛋白质的传统工艺，具有去除率高，节约了大量乙醇的使用量，降低了生产成本；工艺设计合理，生产无毒、无害、生物绿色环保，猪肺原料来源易
4、专利cn103980387b公开了一种生物酶法制备肝素钠的方法，通过将猪肺粉碎、酶解后，进行去蛋白处理，利用树脂交换后，再通过氧化脱色后得肝素钠溶液，将肝素钠溶液实施沉淀、脱水、干燥得到肝素钠精品，该方法来源广泛，通用性强，活性收率高，工艺品质稳定，生产成本低廉，实现肝素钠的低投入、低成本、高回收率。但该方法重点通过优化制备过程中的温度、时间各项参数以及配合d217树脂进行，整体而言，控制变量参数较多，工艺较为复杂，并不适用于工业规模化生产。
5、专利cn104231115a公开了肺组织降解提取肝素新工艺，具体将原料猪肺，牛肺去脂肪和支气管后，捣碎，通过配制复合酶制剂，再加入辅酶成分制得活化酶使用液，该专利技术中的方法降解条件温和，充分保留了猪肺和牛肺中的活性成分，更利于其肝素，蛋白质，多肽等成分的分离。该专利技术中的方法重点优化活化酶使用也以及各步骤参数，整体而言，生产得到的肝素效价相对较低。
6、针对现有技术存在的问题，寻找一种污染小、工艺相对简单同时所得肝素效价高的肝素提取工艺十分必要。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种从猪肺中提取肝素的方法，该方法能有效提高反应效率、降低酶使用量，保证提取安全性的同时节约成本。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
4、(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
5、(2)活化酶制备：将马齿苋、关山樱花、海带、野菊花、余甘子、油菜籽和地菍混合后，加入水浸泡、煎煮、过滤，得到上清液；将上清液和复合酶混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节ph后，加入乙醇、十二烷基磺酸钠，搅拌均匀后，静置，即得活化酶；
6、(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水，第一次升温，调节ph后，初次加入步骤(2)的活化酶，搅拌均匀后，第二次升温、酶解，加入十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶，酶解得到物料a；
7、(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料a升温后保温，过滤，降温后，使用树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
8、(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节ph，向其中加入乙醇，沉淀，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
9、进一步地，按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8-10份马齿苋、5-8份关山樱花、8-10份海带、5-7份野菊花、5-7份余甘子、3-6份油菜籽和3-6份地菍。
10、优选地，按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍。
11、进一步地，步骤(2)中所述上清液和复合酶的重量比为2:1。
12、进一步地，所述关山樱花、油菜籽和地菍的重量比为5-8:3-6:3-6；优选为6:5:5。
13、进一步地，所述马齿苋、海带、野菊花的重量比为8-10:8-10:5-7；优选为8:8:6。
14、进一步地，步骤(2)中所述复合酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木聚糖酶。
15、进一步地，按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括1-5份胰蛋白酶、1-3份木瓜蛋白酶、18-35份纤维素酶、1-3份果胶酶、10-20份淀粉酶、2-4份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、12-14份木聚糖酶。
16、优选地，按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶。
17、进一步地，步骤(2)中所述酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为15-18:30-50:5-8。优选为16:40:7。
18、进一步地，步骤(3)中所述第一次升温的温度为37-40℃，第二次升温的温度为55-60℃。
19、进一步地，步骤(3)中所述初次加入步骤(2)的活化酶的重量与再次加入步骤(2)的活化酶的重量一致，均为猪肺浆料重量的0.75-0.9‰。
20、进一步地，步骤(4)中所述升温的温度为85-90℃，所述降温的温度为55-60℃。
21、在一些具体的实施方式中，所述从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
22、(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
23、(2)活化酶制备：将马齿苋、关山樱花、海带、野菊花、余甘子、油菜籽和地菍混合后，加入上述原料8-10倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料5-7倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将上清液和复合酶混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节ph为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
24、(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的3-5倍，质量分数为1.5-3.5％)，第一次升温，调节ph至8.5-9后，初本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从猪肺中提取肝素的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8-10份马齿苋、5-8份关山樱花、8-10份海带、5-7份野菊花、5-7份余甘子、3-6份油菜籽和3-6份地菍。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述复合酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木聚糖酶。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括1-5份胰蛋白酶、1-3份木瓜蛋白酶、18-35份纤维素酶、1-3份果胶酶、10-20份淀粉酶、2-4份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、2-4份木聚糖酶。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为15-18:3
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述第一次升温的温度为37-40℃，第二次升温的温度为55-60℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述初次加入步骤(2)的活化酶的重量与再次加入步骤(2)的活化酶的重量一致，均为猪肺浆料重量的0.75-0.9‰。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述升温的温度为85-90℃，所述降温的温度为55-60℃。
10.如权利要求1-9任一项所述的方法提取得到的肝素。
...【技术特征摘要】
1.一种从猪肺中提取肝素的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8-10份马齿苋、5-8份关山樱花、8-10份海带、5-7份野菊花、5-7份余甘子、3-6份油菜籽和3-6份地菍。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述复合酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木聚糖酶。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括1-5份胰蛋白酶、1-3份木瓜蛋白酶、18...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢如良，祝新雷，殷金龙，程玉志，王松，宋岩，兰波，
申请(专利权)人：浩泰健康济盛吉林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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