【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，具体涉及一种包含长双歧杆菌的冻干制剂、其制备方法和用途。
技术介绍
1、免疫功能低下或缺乏常常会引发多种局部性或全身性感染症，轻者感冒，次者感染乙肝、丙肝病毒使肝脏受损伤导致肝癌，最严重的是感染艾滋病毒，使人体丧失抗病原的能力。免疫力低下还可引发咽炎、胃炎、肠炎、肺炎、支气管炎、鼻炎、中耳炎、肝炎、乳腺炎、癌症、皮肤感染等疾病。免疫力过高的时候，还会将身体内的正常细胞组织当作是侵入者，随即展开进攻，人们的免疫系统会被破坏，会增加患上免疫系统几率，比如过敏性紫癜、系统性红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎等。人们身体最理想的状态应该是保持稳定的免疫力，即使免疫力不是太高，也不是太低，健康也会维持在平稳状态下。
2、长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)是一类革兰氏阳性、不运动、不产芽孢，细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属，广泛存在于人的消化道、阴道和口腔等生境中，是人肠道菌群的重要组成成员之一。
3、cn114728028a公开一种合生元组合物，包含长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongum subsp.longum)cr15和假链状双歧杆菌(b.pseudocatenulatum)，该组合物用于调节个体胃肠道微生物群。cn114728028a没有公开包含该组合物可以用于提高免疫力，更没有公开包含所述组合物的冻干制剂。
4、因此，需要一种能够长期储存，产品质量稳定，同时能够调节免疫力、维持免疫平衡的长双歧
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的是提供一种包含长双歧杆菌的冻干制剂，所述冻干制剂能够可显著调节免疫力，刺激小鼠巨噬细胞raw264.7产生细胞细子tnf-α和il-6，降低lps诱导的raw264.7细胞产生炎症因子no、tnf-α和il-6，增强细胞免疫功能，体液免疫功能和单核—巨噬细胞功能，维持免疫平衡，且该菌株可高产乳酸，短链脂肪酸，具有良好的生产性能。
2、本专利技术的另一个目的是提供一种包含长双歧杆菌的冻干制剂，其能够显著增强细胞免疫功能、体液免疫功能和单核－巨噬细胞功能，从而维持人体正常免疫功能。
3、本专利技术的另一个目的是，提供一种制备包含长双歧杆菌的冻干制剂的方法，所述方法生产工艺参数简单，易于控制，周期短，所得产品能够长期储存，产品质量稳定。
4、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
5、一方面，本专利技术提供一种冻干制剂，包含长双歧杆菌(bifidobacterium longum)菌株和冻干保护剂，所述长双歧杆菌菌株的保藏编号为cgmccno.25684。
6、在一个示例中，所述长双歧杆菌菌株包含由seq id no:1表示的16srrna基因。
7、优选地，所述冻干保护剂包含：脱脂奶粉80～100g/l，40～50g/l海藻糖，2～3g/l维生素c，4～5g/l l-谷氨酸钠的保护剂。
8、另一方面，本专利技术提供了如上所述的冻干制剂在制备用于提高免疫力，维持免疫平衡的药物中的用途。
9、优选地，所述长双歧杆菌菌株用于双向调节细胞细子肿瘤坏死因子-α(tnf-α)和白细胞介素-6(il-6)的分泌量。
10、优选地，所述冻干制剂用于降低炎症因子no。
11、优选地，所述冻干制剂用于刺激小鼠巨噬细胞产生细胞细子tnf-α和il-6，降低lps诱导的巨噬细胞产生炎症因子no、tnf-α和il-6。
12、优选地，所述冻干制剂用于增强细胞免疫功能、体液免疫功能和单核－巨噬细胞功能，从而维持人体正常免疫功能。
13、再一方面，本专利技术提供了用途制备如上所述的冻干制剂的方法，包括以下步骤：
14、(1)菌株培养，将长双歧杆菌菌株以占培养基总量1-3％的接种量接种于无菌液体培养基中，培养16～24小时，得到种子培养液，然后将得到的种子培养液以占培养基总量1-3％的接种量接种于发酵培养基，进行发酵培养，得到长双歧杆菌发酵菌液；
15、(2)干燥。
16、优选地，所述发酵培养基包含：葡萄糖40～60g/l，酵母提取物60～100g/l，三水合乙酸钠3～10g/l，硫酸镁0.1～0.2g/l,酸酸锰0.05～0.1g/l，磷酸氢二钾1～2g/l，柠檬酸三铵2～4g/l，吐温80 1～2g/l，氯化钙0.05～0.1g/l，l-半胱氨酸盐0.5～1g/l。
17、优选地，发酵过程中自动流加氢氧化钠溶液保持恒定ph 5.5～6.5致发酵至产酸停止，氢氧化钠不再流加时终止发酵。
18、优选地，所述冻干制剂为活菌制剂，所述方法还包括在菌株培养步骤之后以及干燥之前制备冻干保护剂，并且在干燥步骤进行冷冻干燥；可选地，所述冻干保护剂包含：脱脂奶粉80～100g/l，40～50g/l海藻糖，2～3g/l维生素c，4～5g/l l-谷氨酸钠的保护剂。
19、优选地，冷冻干燥的条件为：预冻温度为-40～-45℃，预冻时间为4～5h，一次干燥温度为-20～-15℃，一次干燥时间为20～25h，二次干燥温度为30～35℃，二次干燥时间为6～10h。
20、优选地，所述冻干制剂为死菌制剂，所述干燥步骤为先进行热灭活，然后经过喷雾干燥塔干燥，获得所述死菌制剂；可选地，所述热灭活的条件为80～100℃处理10～40min。
21、本专利技术具有以下有益效果：
22、本专利技术的包含长双歧杆菌菌株的冻干制剂，可显著调节免疫力，刺激小鼠巨噬细胞raw264.7产生细胞细子tnf-α和il-6，降低lps诱导的raw264.7细胞产生炎症因子no、tnf-α和il-6，增强细胞免疫功能，体液免疫功能和单核—巨噬细胞功能，维持免疫平衡，且该菌株可高产乳酸，短链脂肪酸，具有良好的生产性能。
23、本专利技术的制备包含长双歧杆菌的冻干制剂的方法，生产工艺参数简单，易于控制，周期短，所得产品能够长期储存，产品质量稳定。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种冻干制剂，包含长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)菌株和冻干保护剂，所述长双歧杆菌菌株的保藏编号为CGMCC No.25684。
2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述冻干保护剂包含：脱脂奶粉80～100g/L，40～50g/L海藻糖，2～3g/L维生素C，4～5g/L L-谷氨酸钠的保护剂。
3.根据权利要求1或2所述的冻干制剂在制备用于提高免疫力，维持免疫平衡的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于降低炎症因子NO。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于刺激小鼠巨噬细胞产生细胞细子TNF-α和IL-6，降低LPS诱导的巨噬细胞产生炎症因子NO、TNF-α和IL-6。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于增强细胞免疫功能、体液免疫功能和单核－巨噬细胞功能，从而维持人体正常免疫功能。
7.一种制备根据权利要求1或2所述的冻干制剂的方法，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，发酵过程中自动流加氢氧化钠溶液保持恒定pH 5.5～6.5致发酵至产酸停止，氢氧化钠不再流加时终止发酵。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述冻干制剂为活菌制剂，所述方法还包括在菌株培养步骤之后以及干燥之前制备冻干保护剂，并且在干燥步骤进行冷冻干燥；可选地，所述冻干保护剂包含：脱脂奶粉80～100g/L，40～50g/L海藻糖，2～3g/L维生素C，4～5g/L L-谷氨酸钠的保护剂。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，冷冻干燥的条件为：预冻温度为-40～-45℃，预冻时间为4～5h，一次干燥温度为-20～-15℃，一次干燥时间为20～25h，二次干燥温度为30～35℃，二次干燥时间为6～10h。
12.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中，所述冻干制剂为死菌制剂，所述干燥步骤为先进行热灭活，然后经过喷雾干燥塔干燥，获得所述死菌制剂；可选地，所述热灭活的条件为80～100℃处理10～40min。
...【技术特征摘要】
1.一种冻干制剂，包含长双歧杆菌(bifidobacterium longum)菌株和冻干保护剂，所述长双歧杆菌菌株的保藏编号为cgmcc no.25684。
2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述冻干保护剂包含：脱脂奶粉80～100g/l，40～50g/l海藻糖，2～3g/l维生素c，4～5g/l l-谷氨酸钠的保护剂。
3.根据权利要求1或2所述的冻干制剂在制备用于提高免疫力，维持免疫平衡的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于降低炎症因子no。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于刺激小鼠巨噬细胞产生细胞细子tnf-α和il-6，降低lps诱导的巨噬细胞产生炎症因子no、tnf-α和il-6。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干制剂用于增强细胞免疫功能、体液免疫功能和单核－巨噬细胞功能，从而维持人体正常免疫功能。
7.一种制备根据权利要求1或2所述的冻干制剂的方法，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包含：葡萄糖40～60g/l，酵母提取物60～100g/l，三水合乙酸钠3～10g/l，硫酸镁0....
【专利技术属性】
技术研发人员：王婷婷，张世奇，张潇，张峥文，丁岩，张迪，李守远，林钟润，
申请(专利权)人：科郦有限公司，
类型：发明
国别省市：
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