一种鸡MFN1抗原决定簇及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种鸡MFN1抗原决定簇及其应用。本发明专利技术对鸡MFN1蛋白进行分析，筛选出鸡MFN1蛋白的抗原决定簇；通过扩增得到MFN1‑E编码基因，将其插入pET‑28a(+)载体，构建pET‑28a‑Mfn1‑E原核表达质粒；将构建的pET‑28a‑Mfn1‑E原核表达质粒转化入感受态细胞，使用IPTG诱导表达MFN1‑E蛋白；将纯化后的MFN1‑E蛋白制备为抗原并免疫小鼠，获得抗鸡MFN1多克隆抗体。所制备多克隆抗体可用于鸡MFN1蛋白的定量与定位分析。本发明专利技术所制备的抗鸡MFN1多克隆抗体与鸡MFN1蛋白的反应性良好，为进一步研究禽类线粒体动力学提供重要工具和技术手段，具有较高的实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物分子生物学，具体涉及一种鸡mfn1抗原决定簇及其应用。

技术介绍

1、线粒体为具有双层膜的细胞器，生理状态下处于融合与分裂的动态平衡状态，线粒体融合主要由mfn1(mitofusin 1)、mfn2和opa1(optic atrophy)蛋白协同完成，其外膜融合主要由mfn1和mfn2共同介导，其内膜融合主要由opa1介导。据文献报道，敲除mfn1将导致小鼠胚胎的死亡，表明mfn1对胚胎发育过程至关重要；在小鼠胚胎成纤维细胞中，mfn1与mfn2的双敲除将完全阻断线粒体融合，而过表达mfn1与mfn2则可促进线粒体融合。谷物毒素——脱氧雪腐镰刀菌醇可上调线粒体分裂蛋白表达，同时下调线粒体融合蛋白(mfn1、mfn2)表达，导致线粒体过度分裂并造成猪的肠黏膜屏障功能受损。综述所述，mfn1等线粒体融合蛋白是研究线粒体动力学的重要靶标，但目前市场上没有商品化的抗鸡mfn1抗体出售，且人或小鼠来源的mfn1抗体与鸡mfn1蛋白的交叉反应性较低。因此，制备抗鸡mfn1抗体将为研究禽类线粒体动力学提供重要工具和技术手段，具有较高的实际应用价值。...

【技术保护点】

1.一种鸡MFN1抗原决定簇，其特征在于，包含或由鸡MFN1蛋白第238～469位氨基酸构成的序列如SEQ NO.1所示。

2.一种可表达鸡MFN1蛋白抗原决定簇的重组质粒，其特征在于，设计特异性引物如SEQNO.2：5'-CTCCGTCGACAAGCTAATAGATGGGATGCCTCTG-3'、SEQ NO.3：5'-GGTGGTGGTGCTCGACGACTCATTGACTTCACTG-3'所示，以鸡的肠组织cDNA为模板，扩增出编码权利要求2所述鸡MFN1抗原决定簇的DNA片段。

3.权利要求1所述鸡MFN1抗原决定簇在鸡MFN1蛋白的定量与定位分析中应用，...

【技术特征摘要】

1.一种鸡mfn1抗原决定簇，其特征在于，包含或由鸡mfn1蛋白第238～469位氨基酸构成的序列如seq no.1所示。

2.一种可表达鸡mfn1蛋白抗原决定簇的重组质粒，其特征在于，设计特异性引物如seqno.2：5'-ctccgtcgacaagctaatagatgggatgcctctg-3'、seq no.3：5'-ggtggtggtgctcgacgactcat...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑，罗丹妮，余凌子，华裕平，张灵芝，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：