一种哺乳动物细胞核转染液及其制备方法和在细胞核内递送的应用技术

技术编号：39954732 阅读：16 留言：0更新日期：2024-01-08 23:34

本发明专利技术公开了一种哺乳动物细胞核转染液及其制备方法，以及利用该细胞核转染液进行外源DNA和RNA的哺乳动物细胞核内递送的应用方法，该核转染液包括MgCl<subgt;2</subgt;、NaH<subgt;2</subgt;PO<subgt;4</subgt;、HEPEs、KCl以及DEPC处理水，利用该核转染液能够将DNA、RNA递送到多种哺乳动物细胞中，包括多种人以及小鼠的贴壁细胞和悬浮细胞等，而且能够获得非常高效的转染效率，同时核转后的细胞存活率高，更重要的是在常规方法难转染的悬浮细胞也获得了非常高的转染效率和细胞存活率。本发明专利技术采用常规、廉价的化学试剂配制得到该核转染液，成本低于其它常规转染试剂数百倍，操作简便，易于推广到包括基因编辑在内的遗传操作领域中的外源遗传物质细胞内的高效递送相关的基础研究以及临床应用中。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于遗传物质细胞递送领域，具体涉及到一种哺乳动物细胞核转染液及其制备方法和在细胞核内递送的应用。

技术介绍

1、近年来，在生物医学基础研究中的基因操作方法，如基因编辑、基因过表达以及临床上基因与细胞治疗等领域发展迅速，逐渐出现了越来越多的基因编辑技术，但是目前在这些领域内，外源遗传物质的细胞内递送效率成为限制这些基因操作技术的瓶颈步骤，因此，如何有效将外源dna、rna以及蛋白质等遗传物质高效的递送到细胞内对于这些技术在基础研究以及临床治疗中的应用显得越来越重要。

2、目前最常用的递送方法包括脂质体(lipofectamine)递送、聚乙烯亚胺(polyethylenimine，pei)、其它电转以及依赖病毒的递送方法，但是这些方法都有各自的缺陷与问题，包括转染效率低、转染后细胞存活率低、价格昂贵、不适用于悬浮细胞以及病毒整合导致的安全问题等。

3、核转染是近年来逐渐发展起来的一种递送技术，它是一种基于电穿孔的转染方法，可通过施加特定的电压并利用特定的递送试剂将dna、rna以及蛋白质等外源物质直接转移...

【技术保护点】

1.一种哺乳动物细胞核转染液，其特征在于：所述核转染液包括，

2.如权利要求1所述的哺乳动物细胞核转染液，其特征在于：所述核转染液还包括，12～20mM的HEPEs以及15～30mM的KCl。

3.如权利要求1所述的哺乳动物细胞核转染液，其特征在于：所述核转染液中MgCl2的浓度为10～12mM。

4.如权利要求1所述的哺乳动物细胞核转染液，其特征在于：所述核转染液中NaH2PO4的浓度为80～90mM。

5.如权利要求2所述的哺乳动物细胞核转染液，其特征在于：所述核转染液中HEPEs的浓度为12～17mM。