【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法。
技术介绍
1、司美格鲁肽(semaglutide)是由nove nordisk公司研发的长效glp-1类似物，通过基因重组技术，利用酵母生产获得，该药物只需要进行每周一次的皮下注射给药。司美格鲁肽作为glp-1类似物的代表药物之一，在多个临床试验研究已经证明联合不同的口服降糖药可以有效控制血糖，并能够使患者减轻体重、减少收缩压及改善胰岛β细胞功能。
2、四肽非活化酯，简写为tbuo-ste-glu(aeea-aeea-oh)-otbu(化学结构式如式i所示)，是制备司美格鲁肽原料药及其类似物的关键起始物料(作为司美格鲁肽的侧链)，在原料药司美格鲁肽的合成工艺中，其质量状况直接影响多肽药物质量。在四肽非活化酯的制备过程中，会引入手性杂质：四肽非活化酯异构体(下文简称异构体或四肽异构体)，是四肽非活化酯质量控制中非常重要的一个项目，由于四肽非活化酯中的异构体杂质可能伴随化学反应而发生杂质传递和转化，继而增加多肽药物的提纯难度，应增加必要的杂质研究，同时制定合理的控制限度。故应开发出能有效检出四肽非活化酯异构体的分析方法。目前尚未公开四肽非活化酯异构体含量的检测方法。
3、
4、因此有必要开发一种方法简单、成本低、耐用性好的检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法，此方法操
2、本专利技术提供了一种检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：
3、步骤1：将四肽非活化酯与稀释剂混合，配制成供试品溶液；
4、步骤2：使用高效液相色谱对供试品溶液进行检测，以测定四肽非活化酯中异构体的含量；所述高效液相色谱的检测条件如下，
5、所述高效液相色谱的流动相a为磷酸水溶液，流动相b为乙腈；所述洗脱方式为梯度洗脱；
6、步骤3：对四肽非活化酯异构体的含量进行测定，根据峰面积，计算四肽非活化酯中异构体的含量。
7、作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤1中稀释剂为乙腈水溶液。
8、作为本专利技术的一种实施方式，所述乙腈水溶液中乙腈的体积浓度大于或等于30％，优选40％。
9、作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤2中磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.05-0.5％，优选为0.1％。
10、作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤2中，梯度洗脱程序为：0-15min，50％-80％流动相b；15-15.1min，80％-50％流动相b，15.1-20min，50％流动相b。
11、作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤2中，高效液相色谱中色谱柱为手性色谱柱，其填充剂为硅胶表面共价键合-奎宁(8s,9r)-(1s,2s)-环己基氨基磺酸衍生物。
12、作为本专利技术的一种实施方式，所述色谱柱为大赛璐chiralpak zwix(+)，150*3mm，3μm。
13、作为本专利技术的一种实施方式，其特征在于：所述高效液相色谱检测波长为200-230nm，色谱柱的柱温为20-50℃，流动相流速为0.5-2ml/min；所述供试品溶液进样量为5-50μl，进样时间为10-50min。
14、作为本专利技术的一种实施方式，所述高效液相色谱检测波长为200nm，色谱柱的柱温为30℃，流动相流速为1ml/min；所述供试品溶液进样量为10μl，进样时间为20min。
15、本专利技术具有以下有益效果：开发出一种新的高效液相色谱分析方法，以硅胶表面共价键合-奎宁(8s,9r)-(1s,2s)-环己基氨基磺酸衍生物作为填充剂，以磷酸水溶液作为流动相a，以乙腈作为流动相b，采用梯度洗脱方式。本方法流动相配制方法简单，省时省力，耐用性好，适合后续产品的大批量检测，节省成本；四肽非活化酯异构体出峰时间快，节约了分析时间。能以0.5026μg/ml定量限检测四肽非活化酯异构体的含量，以0.25μg/ml检测限检测四肽非活化酯异构体的含量。本专利技术的方法快速简便、专属性好、灵敏度高、准确度高，应用范围广，成本低，适于推广应用。
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1.一种检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1中稀释剂为乙腈水溶液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述乙腈水溶液中乙腈的体积浓度大于或等于30％，优选40％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2中磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.05-0.5％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤2中磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.1％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，梯度洗脱程序为：0-15min，50％-80％流动相B；15-15.1min，80％-50％流动相B；15.1-20min，50％流动相B。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，高效液相色谱中色谱柱为手性色谱柱，其填充剂为硅胶表面共价键合-奎宁(8S,9R)-(1S,2S)-环己基氨基磺酸衍生物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述色谱柱为大赛璐CHIRALP
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱检测波长为200-230nm，色谱柱的柱温为20-50℃，流动相流速为0.5-2mL/min；所述供试品溶液进样量为5-50μL，进样时间为10-50min。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱检测波长为200nm，色谱柱的柱温为30℃，流动相流速为1mL/min；所述供试品溶液进样量为10μL，进样时间为20min。
...【技术特征摘要】
1.一种检测四肽非活化酯异构体的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1中稀释剂为乙腈水溶液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述乙腈水溶液中乙腈的体积浓度大于或等于30％，优选40％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2中磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.05-0.5％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤2中磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.1％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，梯度洗脱程序为：0-15min，50％-80％流动相b；15-15.1min，80％-50％流动相b；15.1-20min，50％流动相b。
7.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：张家丽，景秀，夏海峰，纪兴华，
申请(专利权)人：南京汉欣医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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