【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，具体的说，是一种基于lncrna duxap8的重度子痫前期大鼠模型的构建方法及其应用。
技术介绍
1、子痫前期是一种妊娠20周后以新发高血压（≥140/90 mmhg）为主要临床特征的多因素、多途径、多器官受累的妊娠期综合征，可根据严重程度分为子痫前期和重度子痫前期，滋养细胞浅浸润与螺旋动脉重塑障碍是其病理基础，但具体发病机制尚不明确。已有研究报道lncrna duxap8影响非小细胞肺癌、结直肠癌、肝细胞癌、肾上皮细胞癌等肿瘤细胞的生物学行为如迁移、侵袭及凋亡等。因此，lncrna duxap8异常表达可能参与调控滋养细胞生物学行为，是子痫前期发生发展的中心环节。
2、由于人体实验的医学伦理学制约，动物模型成为研究子痫前期发生发展机制及探索防治措施的重要工具，然而目前并没有能很好反应重度子痫前期这种疾病严重程度的动物模型。啮齿类动物胎盘形成方式与滋养细胞侵袭程度与人类接近，母体有子宫螺旋动脉重塑的表现，造模成功后，可出现子痫前期的典型表型。既往采用的子痫前期大鼠模型为通过大鼠尾静脉注射构建的sflt1腺病毒，但此模型一般不会出现多器官脏器的损害，不能很好地反应严重的子痫前期。lncrna duxap8是一个新型的假基因，已有研究报道其过表达与肿瘤的增殖、侵袭、迁移、抗自噬有关（参见专利cn 201610717476.6公开的一种长非编码rna及其在诊断/治疗胃癌中的应用，专利cn201810604566.3公开的duxap8在干细胞癌诊断和治疗中的应用，以及专利cn2018108872
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种基于lncrna duxap8的重度子痫前期大鼠模型的构建方法及其应用，通过构建过表达lncrnaduxap8的孕鼠模型可反映重度子痫前期的特征性症状和体征改变，并能反映该疾病的严重程度，操作可控性好、稳定性佳，并对探讨重度子痫前期临床诊疗和处置策略的选择具有重要价值。
2、本专利技术通过下述技术方案实现：一种基于lncrna duxap8的重度子痫前期大鼠模型的构建方法，采用sd大鼠作为模型动物，对sd孕鼠注射ad-duxap8，之后常规饲养，通过监测其血压、24-h尿蛋白，观察主要脏器病理变化及子代宫内发育变化来确定模型是否构建成功。
3、sd大鼠为spf级，周龄为10周龄。
4、sd孕鼠的给药时间为孕第9.5天。
5、注射剂量及处理方式为2×109pfu ad- duxap8尾静脉注射。
6、在孕9和15天对sd孕鼠进行称重，测量无创血压，收集尿液行24-h尿蛋白检测；在孕第19天测量孕鼠有创血压，收集尿液行24-h尿蛋白检测，收集血清行plgf和sflt-1检测，收集胎盘、肝脏和肾脏作形态学染色观察，仔鼠计数、称重和测量身长。
7、本专利技术所建立的重度子痫前期大鼠模型，具有血压和24-h蛋白尿升高的子痫前期典型症状，这与人类子痫前期的病理过程相吻合。此外，还检测到了胎盘、肝肾的结构功能损伤，并观察到胎鼠宫内发育受限，这些都能很好地反映重度子痫前期的全身多系统功能障碍及严重程度，以用于研究重度子痫前期发生发展的机制及预防治疗措施。
8、进一步的，本专利技术还提供了采用上述方法构建的重度子痫前期大鼠模型在用于制备防治重度子痫前期的药物中的应用。
9、以及采用上述方法构建的重度子痫前期大鼠模型在用于制备诊断/预测重度子痫前期的产品中的应用。
10、所述产品为试剂或试剂盒。
11、本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
12、（1）本专利技术方法构建的重度子痫前期大鼠模型，可反映重度子痫前期这一涉及全身多器官组织疾病的严重程度，除具有血压升高、蛋白尿等子痫前期典型症状和体征外，还出现了肝肾结构功能损害，并且出现了胎仔宫内发育受限等表现。这些都反映了重度子痫前期这种疾病的全身多系统性及严重程度，更具代表性。
13、（2）本专利技术提供了一种标准化、安全高效、稳定可靠的重度子痫前期动物模型的构建方法，为探讨重度子痫前期的发病机制、临床诊疗和处置策略等提供了动物模型。
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1.一种基于LncRNA DUXAP8的重度子痫前期大鼠模型的构建方法，其特征在于：采用SD大鼠作为模型动物，对SD孕鼠注射Ad-DUXAP8，之后常规饲养，通过监测其血压、24-h尿蛋白，观察主要脏器病理变化及子代宫内发育变化来确定模型是否构建成功。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：SD大鼠为SPF级，周龄为10周龄。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：SD孕鼠的给药时间为孕第9.5天。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：注射剂量及处理方式为2×109 PFUAd- DUXAP8尾静脉注射。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：在孕9和15天对SD孕鼠进行称重，测量无创血压，收集尿液行24-h尿蛋白检测；在孕第19天测量孕鼠有创血压，收集尿液行24-h尿蛋白检测，收集血清行PlGF和sFlt-1检测，收集胎盘、肝脏和肾脏作形态学染色观察，仔鼠计数、称重和测量身长。
6.采用权利要求1～5任一项所述方法构建的重度子痫前期大鼠模型在用于制备防治重度子痫前期的药物中的应用。p>
7.采用权利要求1～5任一项所述方法构建的重度子痫前期大鼠模型在用于制备诊断/预测重度子痫前期的产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述产品为试剂或试剂盒。
...【技术特征摘要】
1.一种基于lncrna duxap8的重度子痫前期大鼠模型的构建方法，其特征在于：采用sd大鼠作为模型动物，对sd孕鼠注射ad-duxap8，之后常规饲养，通过监测其血压、24-h尿蛋白，观察主要脏器病理变化及子代宫内发育变化来确定模型是否构建成功。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：sd大鼠为spf级，周龄为10周龄。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：sd孕鼠的给药时间为孕第9.5天。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：注射剂量及处理方式为2×109 pfuad- duxap8尾静脉注射。
5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：周容，廖灵蕴，尹杨雪，徐琴，魏晓红，张燕萍，刘敏，谢双双，陈洪琴，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：
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