一种用于血清样本中制造技术

本发明专利技术涉及一种用于血清样本中

【技术实现步骤摘要】
一种用于血清样本中25
‑
羟基维生素D检测的试剂盒、方法和应用


[0001]本专利技术涉及药物检测
，尤其涉及一种用于血清中
25
‑
羟基维生素
D
检测的试剂盒
、
方法和应用
。

技术介绍

[0002]维生素
D
是人体必需的脂溶性维生素，在人体钙磷代谢和骨质钙化中起着重要的作用，它不仅可以维持钙
、
磷水平的稳定，促使骨的钙化，还能诱导细胞分化
、
抑制细胞增殖
、
促进肿瘤细胞凋亡以及免疫调节作用等
。
维生素
D
人们通过阳光直射皮肤或者从食物中获得的维生素
D
在体内经过两次羟基化作用发挥效应
。25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
是维生素
D
在血液循环中的主要存在形式，浓度较高且稳定，因此可以作为维生素
D
在人体内的浓度指示剂，用于评价人体维生素
D
的营养状况
。
[0003]目前，
25
‑
羟基维生素
D
的检测方法可分为色谱法和免疫法两大类
。
色谱法主要有液相色谱法
(HPLC)
和液相色谱
‑
串联质谱法
(LC
‑/>MS/MS)
，免疫法主要有放射免疫法
(RIA)、
酶联免疫法
(ELISA)、
化学发光免疫法
(CLIA)、
电化学发光免疫测定法
(ECLIA)。
[0004]免疫法设备简单
、
易操作，对检测人员的专业度要求适中，不过免疫法只能测定
25
‑
羟基维生素
D
的总量，且影响实验结果的因素较多，如且基质
、
环境
、
抗体质量等，批内批间精密度偏差较大
。
[0005]液相色谱
‑
串联质谱法
(LC
‑
MS/MS)
具有很高的灵敏度高
、
专一性和准确性，并且可同时测定
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的含量，但是
LC
‑
MS/MS
测定
25
‑
羟基维生素
D
时，前处理步骤相对繁琐，需要进行液液萃取或液固萃取，耗时且引入不准确度，仪器方面则是操作复杂，价格昂贵且维护成本高，同时还要求检验人员具备较高水平的专业素养，因此在大型医院和高级科研院校使用较多，基层难以推广
。
[0006]液相色谱法
(HPLC)
可同时检测
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
，分离效果好
、
分离速度快
、
重复性好
、
精确度高，但是由于
25
‑
羟基维生素
D
在血清中的含量较低
(ppb
级
)
，因此传统的液相色谱仪灵敏度很难达到，需要在液液萃取或液固萃取后，增加氮吹浓缩处理，这种方式通量低，前处理复杂，且增加了试剂成本
。

技术实现思路

[0007]本专利技术为克服上述技术的缺陷，提供一种新的用于血清中
25
‑
羟基维生素
D
检测的试剂盒，利用所述试剂盒采用二维液相色谱法，血清样本仅需进行蛋白沉淀即可上机检测，相比于液液萃取法，节省数倍时间与试剂消耗；该方法可在
8min
内完成
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的分离除杂
—
浓缩
—
定量检测，同时该方法的灵敏度
、
准确度和精密度较高，满足临床上对于血清中
25
‑
羟基维生素
D
含量的测定要求；此外，该方法简单易操作，相关人员经过专业培训即可使用，且试剂成本与维护成本较低，容易推广
。
[0008]为达到上述目的，本专利技术第一方面提供了一种用于血清中
25
‑
羟基维生素
D
检测的
试剂盒，所述试剂盒用于二维液相色谱法检测血清样本中
25
‑
羟基维生素
D
的含量，所述试剂盒包括萃取液
、
校准品和质控品；其中，萃取液包括蛋白沉淀剂和流动相，蛋白沉淀剂包括甲醇和乙腈，流动相包括一维流动相和二维流动相，一维流动相包括甲醇和水，二维流动相包括乙腈
、
水和甲酸；校准品包括
25
‑
羟基维生素
D3、25
‑
羟基维生素
D2
和
BSA
；质控品包括
25
‑
羟基维生素
D3、25
‑
羟基维生素
D2
和
BSA。
[0009]本专利技术中，所述试剂盒萃取液中的蛋白沉淀剂用于血清样本的前处理，血清样本经简单的蛋白沉淀后即可上机测试，简化前处理流程，节约时间，降本增效，且减小了前处理过程中所带来的误差
。
[0010]在一些实施方式中，所述试剂盒中还包括校准品，校准品是由
BSA
溶液配制的系列已知浓度的
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
混合溶液的冻干粉；校准品中
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的浓度各为7～
150ng/mL。
[0011]在一些具体实施例中，所述校准品包括6种浓度的
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
冻干粉
。
取
2mL
纯水于每瓶校准品中，溶解冻干粉，再涡旋混匀，其中校准品
L1
中
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于血清样本中
25
‑
羟基维生素
D
检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于二维液相色谱法检测血清样本中
25
‑
羟基维生素
D
的含量，试剂盒包括萃取液
、
校准品和质控品；其中，萃取液包括蛋白沉淀剂和流动相，蛋白沉淀剂包括甲醇和乙腈，流动相包括一维流动相和二维流动相，一维流动相包括甲醇和水，二维流动相包括乙腈
、
水和甲酸；校准品包括
25
‑
羟基维生素
D3、25
‑
羟基维生素
D2
和
BSA
；质控品包括
25
‑
羟基维生素
D3、25
‑
羟基维生素
D2
和
BSA。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白沉淀剂为体积比为4：1的乙腈
‑
甲醇混合溶液
。3.
根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括的校准品为由
BSA
溶液配制的系列已知浓度的
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
混合溶液的冻干粉；校准品中
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的浓度各为7～
150ng/mL。4.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括的质控品为由
BSA
溶液配制的已知浓度的
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
混合溶液的冻干粉；质控品包括低浓度质控品和高浓度质控品，所述的低浓度质控品中
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的浓度为
15
～
30ng/mL
，高浓度质控品中
25
‑
羟基维生素
D3
和
25
‑
羟基维生素
D2
的浓度为
50
～
80ng/mL。5.
一种使用如权利要求1‑4中任何一项所述的试剂盒对待测血清样本中
25
‑
羟基维生素
D
检测的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：石林玥，李伟，赵富荣，张欣，刘晓，
申请(专利权)人：科诺美苏州医疗器械科技有限公司，
类型：发明
国别省市：