肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法技术

本方案属于细菌药敏试验领域，具体涉及一种肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法，包括以下步骤：步骤

【技术实现步骤摘要】
肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法


[0001]本方案属于细菌药敏试验领域，具体涉及一种肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法
。

技术介绍

[0002]细菌培养及药敏试验是诊治感染性疾病
(
如肺炎
、
脑膜炎
、
泌尿道感染
、
结核
、
伤害
、
霍乱
、
败血症，以及疖
、
痈
)
全过程的关键
。
我们不妨把这个过程当作一次军事行动，首先侦辑元凶，接着制定方案，最后克敌制胜
。
[0003]细菌培养
——
侦缉元凶
。
我们知道，自然界存在着较多的微生物，其中能引起人体患病的细菌侵犯人体后，可引起各种感染性疾病
。
同一种细菌侵犯人体不同的部位，可引起不同疾病的发生；而同一种疾病又可由不同细菌的侵犯而引起
。
为了明确诊断，只有从病人的血
、
尿或其他分泌物中取样进行细菌培养，快速
、
准确地“侦缉”到病原菌
。
[0004]药敏试验
——
制定方案
。
由于各种细菌对抗菌药物的敏感性不同，即使同一种细菌的不同菌株对各种抗菌药物的敏感性也有差别；在治疗过程中，细菌对药物的敏感性也会发生变化；随着各种抗菌药物的广泛应用，细菌的抗药性也随之增多
。
只有对病原菌进行多种抗菌药物的敏感度试验，才能选择到有效的抗菌药物及浓度
。
[0005]血流感染是一种严重的全身感染性疾病，发病率和死亡率较高
。
血培养是诊断血流感染的金标准
,
快速
、
准确的提供病原菌鉴定及药敏结果，是临床进行抗感染的关键
。
更早的进行正确的抗感染治疗可以明显提高患者的生存率
。
[0006]专利号为
CN202211395997.6
的专利，公开了一种革兰氏阴性菌的药敏鉴定方法，包括以下步骤：
S1
：抗生素
、
氘水孵育细菌：向抗生素溶液中接种革兰氏阴性菌，配制成浓度为
103
？5×
103CFU/ml
的悬浮菌液，再于
96
孔板的各孔中加入
20ul
的该悬浮菌液和
20ul
氘水，
37℃
恒温孵育
30min
；
S2
：药敏样品自动化层流洗涤：将含
S1
孵育后悬浮菌液的
96
孔板置于层流洗涤系统中，利用重力和流体力学的层流效应进行自动化洗涤；
S3
：拉曼光谱检测；
S4
：药敏性结果分析：观察拉曼位移在
2200
波数处是否出现氘水拉曼峰，以鉴定革兰氏阴性菌对抗生素是否敏感
。
本专利技术药敏鉴定方法将抗生素
、
氘水孵育一体化，结合自动化层流洗涤，无需
15h
‑
7d
长周期培养
、
染色即可检测出革兰氏阴性菌的拉曼光谱图，通过所建数据库和智能识别鉴定
。
然而该方法需要拉曼光谱仪，不太适合基层实验室
。
[0007]而现有的肠杆菌科细菌阳性血培养的药敏试验方法是：血培养仪阳性报警后按传统流程处理，涂片革兰染色
、
显微镜观察
、
转种血或巧克力平板在厌氧或需氧条件下培养
24
‑
48h
获得纯菌落后，再使用现有的商品化仪器如
Vitek 2Compact、BD PhoenixTM
‑
100
和
MicroScan WalkAway 96Plus
等进行鉴定和药敏试验
。
[0008]但是目前这样的方法需要将阳性血培养液转种至培养基上，培养孵育至肉眼可见的单个纯菌落后，再挑选单个纯菌落通过后续的方法进行鉴定和药敏试验，整个过程耗时较长
(
约
24h
‑
48h)。

技术实现思路

[0009]本方案提供一种肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷
。
[0010]为了达到上述目的，本方案提供一种肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法，包括以下步骤：
[0011]步骤
S10
：用无菌注射器抽取
1ml
血培养阳性液滴两滴于干净的载玻片上，进行涂片；
[0012]步骤
S20
：待其自然干燥后进行革兰染色的初染，滴加革兰染色
A
液于涂布细菌处，染色
15s
后用细流水冲洗甩干；
[0013]步骤
S30
：进行媒染，滴加革兰染色
B
液数滴，染色
15s
后用细流水冲洗，甩干；
[0014]步骤
S40
：进行脱水处理，滴加革兰染液
C
液数滴，轻轻晃动玻片至无紫色脱出为止，然后用流水冲洗，甩干；
[0015]步骤
S50
：复染，滴加革兰染色
D
液数滴，染色
15s
，用流水冲洗；
[0016]步骤
S60
：待标本片自然干燥或用吸水纸吸干后在涂菌处滴加一滴香柏油油镜观察
、
观察是否为革兰阴性杆菌；若为革兰阴性杆菌则进行分离操作；
[0017]步骤
S70
：分离，用无菌注射器抽取阳性瓶内血标本
8ml
，分别等量注入两只血清分离胶促凝管；
3000r/min
离心
10min,
弃上层血清
,
分别用无菌吸管吸取
1ML
无菌生理盐水小心吹打灰白色细菌层后吸取该菌液置于同一只血清分离胶促凝管；在装有菌液的血清分离胶促凝管中加入适量无菌生理盐水混匀
,3000r/min
离心
10min,
弃上清备用，用无菌吸管吸取
1ML
无菌生理盐水小心吹打灰白色细菌层后吸取该菌液置于一只无菌试管，在装有菌液的无菌试管中加入适量无菌生理盐水混匀
,3000r/min
离心
10min,
弃上清备用，用于调制接种菌液；
[0018]步骤
S70
：用上述分离的细菌悬液，按全自动鉴定和药敏分析仪说明书调制
0.5McF
的
ID
肉汤和
AST
肉汤进行鉴定和药敏试验...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
肠杆菌科细菌阳性血培养直接药敏试验处理方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤
S10
：用无菌注射器抽取
1ml
血培养阳性液滴两滴于干净的载玻片上，进行涂片；步骤
S20
：待其自然干燥后进行革兰染色的初染，滴加革兰染色
A
液于涂布细菌处，染色
15s 后用细流水冲洗甩干；步骤
S30
：进行媒染，滴加革兰染色
B
液数滴，染色
15s
后用细流水冲洗，甩干；步骤
S40
：进行脱水处理，滴加革兰染液
C
液数滴，轻轻晃动玻片至无紫色脱出为止，然后用流水冲洗，甩干；步骤
S50
：复染，滴加革兰染色
D
液数滴，染色
15s
，用流水冲洗；步骤
S60
：待标本片自然干燥或用吸水纸吸干后在涂菌处滴加一滴香柏油油镜观察
、
观察是否为革兰阴性杆菌；若为革兰阴性杆菌则进行分离操作；步骤
S70
：分离，用无菌注射器抽取阳性瓶内血标本
8ml
，分别等量注入两只血清分离胶促凝管；
3000r
／
min 离心
10 min,
弃上层血清
,
分别用无菌吸管吸取
1ML
无菌生理盐水小心吹打灰白色细菌层后吸取该菌液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘治芩，夏静，王雪娇，宋丽郦，
申请(专利权)人：重庆市第十三人民医院重庆市老年病医院，
类型：发明
国别省市：