一种深海来源的制造技术

本发明专利技术属于生物化学和酶工程技术领域，具体涉及一种深海来源的

【技术实现步骤摘要】
一种深海来源的PET水解酶dsPETase07及其应用


[0001]本专利技术属于生物化学和酶工程
，具体涉及一种深海来源的
PET
水解酶及其应用
。

技术介绍

[0002]塑料因其耐久性
、
延展性
、
可塑性
、
稳定性
、
透光性等优良属性已遍布人类生产生活的各个方面
。
而塑料在常温下的化学惰性使得大量的塑料废弃物造成的白色污染日益严重，危害生态环境与人类健康
。PET
是一类由对苯二甲酸和乙二醇为单体聚合而成的聚酯类塑料，在纺织产业
、
食品饮料包装等多个领域有着广泛应用
。
传统的
PET
处理手段如机械破碎
、
热塑再加工以及化学分解等方法成本昂贵，且会造成环境的二次污染
。
近年来，基于
PET
水解酶的生物酶法降解展现出巨大的应用潜力，如来自
PET
降解菌
Ideonella sakaiensis 201
‑
F6
中的
IsPETase(Yoshida et al.,2016)
，以及来自于枝叶堆肥的宏基因组的
LCC(Sulaiman et al.,2012)
，均有着很好的
PET
水解活性，而利用它们的突变体进行
PET
水解
、
单体回收以及
PET
再合成，已展现出
PET
的循环经济在理论上的可行性
(Lu etal.,2022
；
Tournier et al.,2020)。
[0003]PET
水解酶的嗜盐性研究较少，来自嗜盐菌产期弧菌
(Vibrio gazogenes)
中的
PET6
被证明可耐受0～
2.5M
的
NaCl
，但其活性远远低于
IsPETase(Weigert etal.,2022)
，因此，高盐条件下能够表现出高
PET
水解活性的酶目前是一个空白
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是解决现有的高
PET
水解活性的酶不能耐受高盐环境的问题，提供一种来自深海
1199
米处热泉的宏基因组中挖掘并鉴定的
PET
水解酶
dsPETase07
，该酶能够在高盐或高温的环境下展现出对
PET
的高水解活性
。
[0005]本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是：一种深海来源的
PET
水解酶
dsPETase07
，其氨基酸序列如
SEQ ID No.1
所示
。
[0006]优选地，本专利技术还提供了编码所述
PET
水解酶
dsPETase07
的基因，其核苷酸序列如
SEQ ID No.2
所示
。
[0007]优选地，本专利技术还提供了所述
PET
水解酶
dsPETase07
的载体，所述载体中包含所述的基因
。
[0008]优选地，所述的载体为真核载体或者原核载体
。
[0009]优选地，所述的载体为质粒载体或者病毒载体
。
[0010]优选地，本专利技术还提供了包含所述的载体的宿主细胞
。
[0011]优选地，所述的宿主细胞为细菌
。
[0012]优选地，本专利技术还进一步提供了所述的
PET
水解酶
dsPETase07、
所述的载体
、
所述的宿主细胞在高盐或高温条件下降解
PET
中的应用
。
[0013]优选地，本专利技术还进一步提供了
PET
降解剂，该
PET
降解剂含有所述的
PET
水解酶
dsPETase07、
所述的表载体
、
所述的宿主细胞中的至少一种
。
[0014]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的
PET
水解酶
dsPETase07
能够在高盐或高温的环境下催化
PET
的水解反应，生成
MHET
和
TPA
，后续可以通过回收
MHET
和
TPA
重新聚合生成新的
PET
使其达到循环的目的；同时，该酶嗜盐的特性使其更好的适用于高盐的工业废水
、
污水处理，因此本专利技术在环保
、
催化领域都有着重要意义
。
附图说明
[0015]图1为
dsPETase07
在不同
NaCl
浓度下催化
PET
水解；
[0016]图2为表达
dsPETase07
的
pDSP07
质粒图谱；
[0017]图3为纯化后的
dsPETase07
的
SDS
‑
PAGE
分析；
M
，蛋白
marker
；
1.
纯化后的
dsPETase07
；
[0018]图4为
dsPETase07
在不同盐浓度下催化
PET
水解
48
小时的产物浓度；
HPLC
可检测到的水解产物为
TPA
与
MHET
，以反应液中
TPA
与
MHET
的浓度之和表现
PET
水解活性的大小；
[0019]图5为
dsPETase07
在不同盐浓度下催化
PET
水解
120
小时的产物浓度；
HPLC
可检测到的水解产物为
TPA
与
MHET
，以反应液中
TPA
与
MHET
的浓度之和表现
PET
水解活性的大小；
[0020]图6为
dsPETase07
催化
scPET
膜的完全降解；试管中反应体系为
3mL
，
scPET
为
3mg
，反应时间见左侧箭头标注，酶浓度标注于酶名称的下方；
[0021]图7为
dsPETase07
在不同温度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种深海来源的
PET
水解酶
dsPETase07
，其特征在于：其氨基酸序列如
SEQ ID No.1
所示
。2.
编码如权利要求1所述的
PET
水解酶
dsPETase07
的基因，其特征在于：其核苷酸序列如
SEQ ID No.2
所示
。3.
包含如权利要求2所述的基因的载体
。4.
根据权利要求3所述的载体，其特征在于：所述的载体为真核载体或者原核载体
。5.
根据权利要求3所述的载体，其特征在于：所述的载体为质粒载体或者病毒载体
。6.
包含如权利要求3‑5任一项所述的表...

【专利技术属性】
技术研发人员：李盛英，刘琨，孟亮，李登辉，张成松，陆瑞，姬倩悦，
申请(专利权)人：青岛华大基因研究院，
类型：发明
国别省市：