叶下珠提取物与制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种叶下珠提取物与制备方法及其应用，属于植物提取物应用技术领域；本发明专利技术提供的技术方案以叶下珠全草为原料，用氯化胆碱与苹果酸组成的低共熔溶剂提取叶下珠，再采用大孔树脂对其提取上清液进行色谱分离，先用纯水洗脱后，再用乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，浓缩，冻干制备而成叶下珠提取物；通过抗肿瘤生物活性试验证明，叶下珠提取物对人膀胱癌细胞（

【技术实现步骤摘要】
叶下珠提取物与制备方法及其应用


[0001]本专利技术申请涉及中药植物提取物
，特别涉及叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用
。

技术介绍

[0002]膀胱癌是全球第十大常见恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一
。
[0003]病理临床上膀胱癌分为非肌层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌，其中前者占
75%
～
85%。
非肌层浸润性膀胱癌的治疗主要是以手术治疗联合术后膀胱灌注化疗药物为主，其手术价格昂贵，灌注药物的半衰期短，需要反复
、
大剂量灌注
、
毒副作用大等缺点，以及治疗后复发率高达
60%
，甚至进展为肌层浸润性膀胱癌，生存期短等，对患者家庭经济
、
精神情况以及患者的生活质量都造成严重困扰
。
基因治疗目前已部分应用于临床，但尚未成熟，仍需大量临床数据支持
。
因此需要寻找新的“物美价廉”的治疗植物药或其主要成分，对于预防
、
治疗肿瘤的转移和复发，提高膀胱癌患者的生活质量和延长患者的生存期显得尤为迫切
。
[0004]中药是中国传统医学的核心组成部分，具有资源丰富
、
毒副作用小
、
蕴含化学成分多样化等特点，拥有几千年的历史和丰富的经验，是新药发现
、
防治肿瘤药物的重要来源
。
[0005]叶下珠（
Phyllanthus urinaria L.
），是大戟科叶下珠属的一年生草本植物，全草入药，味苦，性凉
。
多生于山坡
、
路旁
、
田间，花沿茎叶下而生，结果时状如小珠，故有叶下珠之称
。
大戟科叶下珠属植物全世界有
600
多种，中国有
33
种4变种，主要分布于浙江
、
广东
、
海南
、
广西
、
四川和云南等地
。
清代赵学敏
《
本草纲目拾遗
》
和吴其浚的
《
植物名实图考
》
中有关叶下珠的记载，又名珍珠草，软枝叶下珠等，其味甘淡
、
微苦，凉
。
归肝
、
脾
、
肾经
。
全草可入药，“能除瘴气”，具有清热消肿
、
利水明目
、
消积等功效
。
国内外研究显示，叶下珠属植物中含有鞣质
、
黄酮
、
酚酸等成分，有保肝
、
抗菌
、
抗肿瘤
、
抗内毒素
、
镇痛等药理活性
。
[0006]低共熔溶剂（
deep eutectic solvent
，
DES
）是一种新型绿色溶剂，它保有离子液体的大部分优势，且克服了其高毒性，高成本，生物降解性差等弊端，具有无毒
、
环保
、
高效的优点
。DES
在提取天然产物的过程中，可以与目标物形成较强作用力的分子间氢键，使其具有优于传统溶剂的选择性和萃取能力，并且可提高不稳定的生物活性成分的稳定性，因此正逐渐应用于天然产物的绿色提取
。

技术实现思路

[0007]为此，本专利技术的第一个目的是提出一种叶下珠提取物及其制备方法，该方法制备的叶下珠提取物生物活性高，稳定性好
。
[0008]本专利技术的第二个目的是该叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用，以开发新的具有抑制膀胱癌肿瘤增殖和转移的天然药物
。
[0009]为此，本专利技术提供的第一个技术方案是这样的：一种叶下珠提取物的制备方法，依次包括下述步骤：
（1）低共熔溶剂的制备以氯化胆碱为氢受体，苹果酸为氢供体，将氯化胆碱与苹果酸混合，于
80℃
搅拌反应4‑
6 h
，得到无色透明液体，之后冷却至室温，制得低共熔溶剂；（2）采集叶下珠全草自然干燥，粉碎，过
20
‑
40
目筛，制得叶下珠粉；（3）称取叶下珠粉末
1.0 g
置入
50 mL
圆底烧瓶中，加入含水量
40wt%
的步骤2）制备的低共熔溶剂，液料比为
10
‑
20 mL/g
，在
60
‑
80℃
提取
40
‑
60 min
；（4）提取后将提取得到的混合物用离心机在
6000 rpm
下离心
10 min
，收集提取物上清液
20 mL
；（5）使用大孔树脂分离叶下珠提取物上清液称取
50 g
大孔树脂，用
500 m L
水浸润，装柱，静置
24 h
，将
20 mL
提取液上清液加入到色谱柱中，先用
200 ml
去离子水洗涤色谱柱，再用
400 mL
乙醇洗脱，合并乙醇相减压浓缩，回收乙醇，得到叶下珠提取物浸膏；（6）在
‑
50 ℃
至
‑
30 ℃
，冷冻干燥叶下珠提取物浸膏
18
‑
20
小时获得叶下珠提取物
。
[0010]进一步的，上述的叶下珠提取物的制备方法，步骤（1）所述的氯化胆碱与苹果酸摩尔比为
1:1
或
1:2
；步骤（5）所述的减压蒸发条件为真空度
30
‑
50kPa
，温度
35
‑
45℃。
[0011]本专利技术提供的第二个技术方案是一种叶下珠提取物，由第一个技术方案所述的方法制备得到的
。
[0012]本专利技术提供的第三个技术方案是叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用
。
[0013]进一步的，上述的叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用，具体为叶下珠提取物在制备抑制膀胱癌细胞增殖药物中的应用
。
[0014]进一步的，上述的叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用，具体为叶下珠提取物在制备抑制膀胱癌细胞迁移药物中的应用
。
[0015]进一步的，上述的叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用，具体为叶下珠提取物在制备抑制膀胱癌细胞周期进程药物中的应用
。
[0016]进一步的，上述的叶下珠提取物在制备防治膀胱癌药物中的应用，所述叶下珠提取物抑制膀胱癌细胞增殖的
IC
50
为
77.82...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种叶下珠提取物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：（1）低共熔溶剂的制备以氯化胆碱为氢受体，苹果酸为氢供体，将氯化胆碱与苹果酸混合，于
80℃
搅拌反应4‑
6 h
，得到无色透明液体，之后冷却至室温，制得低共熔溶剂；（2）采集叶下珠全草自然干燥，粉碎，过
20
‑
40
目筛，制得叶下珠粉；（3）称取叶下珠粉末
1.0 g
置入
50 mL
圆底烧瓶中，加入含水量
40wt%
的步骤2）制备的低共熔溶剂，液料比为
10
‑
20 mL/g
，在
60
‑
80℃
提取
40
‑
60 min
；（4）提取后将提取得到的混合物用离心机在
6000 rpm
下离心
10 min
，收集提取物上清液
20 mL
；（5）使用大孔树脂分离叶下珠提取物上清液称取
50 g
大孔树脂，用
500 m L
水浸润，装柱，静置
24 h
，将
20 mL
提取液上清液加入到色谱柱中，先用
200 ml
去离子水洗涤色谱柱，再用
400 mL
乙醇洗脱，合并乙醇相减压浓缩，回收乙醇，得到叶下珠提取物浸膏；（6）在
‑
50 ℃
至
‑
30 ℃
，冷冻干燥叶下珠提取物浸膏
18
‑
20
小时获得叶下珠提取物

【专利技术属性】
技术研发人员：何晓雯，方岩雄，黄华容，纪阿林，谭伟，蔡晓兰，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：