病毒制造技术

本发明专利技术公开了一种病毒

【技术实现步骤摘要】
病毒S蛋白突变体的构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及病毒
S
蛋白突变体的构建
，具体为病毒
S
蛋白突变体假病毒盘的构建及其疫苗评价应用
。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒
SARS
‑
CoV
‑2入侵宿主细胞主要由刺突蛋白
S
介导，
S
蛋白的突变不仅会影响病毒的复制能力和感染能力，其同样可能引起宿主免疫反应变化
。
尽管
SARS
‑
CoV
‑2的突变频率低于其它无逆转录校正功能的
RNA
病毒，目前这些突变位点如何影响病毒入侵宿主细胞没有明确结论
。
另外，病毒表面糖蛋白突变可能发生抗原性漂移
(Antigenicdrift)
现象，亲本株来源的
SARS
‑
CoV
‑2疫苗交叉免疫保护作用未知
。
[0003]目前传统疫苗效果检测手段是利用/>hACE2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种病毒
S
蛋白突变体的构建方法，其特征在于，过程包括：
1)
根据基因组序列号
GenBank:MN908947
，密码子优化合成
S
蛋白全长基因序列并连接真核表达质粒
pcDNA3.1(+)
得到重组表达质粒
pcDNA3.1(+)
‑
Spike
；
2)
采用点突变的方式对真核表达质粒
pcDNA3.1(+)
‑
Spike
进行反向
PCR
，正反向扩增引物5’
端包含
15
‑
21bp
反向互补区域，引物设计时将引入突变包含在互补区域内；对目标质粒扩增后对产物消化，去除甲基化模板质粒后进行重组反应；反应产物转化并进行克隆鉴定，测序正确即为突变成功的
S
蛋白突变体表达质粒
。2.
一种病毒
S
蛋白突变体，其特征在于，所述病毒
S
突变体由权利要求1所述的方法构建得到
。3.
权利要求2所述的病毒
S
蛋白突变体在构建假病毒盘和对疫苗效价评价中的应用
。4.
一种病毒
S
蛋白突变体假病毒盘的构建和疫苗效价评价方法，其特征在于，包括假病毒体系的构建
、
假病毒活性的检测和假病毒用于新冠疫苗免疫效果的评估
。5.
根据权利要求4所述的一种病毒
S
大白突变体假病毒盘的构建方法，其特征在于，所述假病毒体系的构建为：根据国家生物信息中心新型冠状病毒信息库公布的
SARS
‑
CoV
‑
2S
蛋白基因突变位点分析数据，
S
蛋白的突变分为
ACE2
结合区域
‑
非关键互作氨基酸
、ACE2
结合区域
‑
关键互作氨基酸和非
ACE2
结合区域，随后选择数据库中变异位点毒株数量较多且传播范围较广的突变位点进行统计，然后构建病毒
S
蛋白突变体
。6.
根据权利要求5所述的一种病毒
S
大白突变体假病毒盘的构建方法，其特征在于，所述假病毒活性的检测为：将构建的不同
S
蛋白突变位点的表达质粒分别与
HIV
‑1骨架质粒
pNL4
‑
3 Luc+R
‑
E
‑
(
荧光素酶基因替换
HIV
‑1的
Env
包膜蛋白基因
)
共转染
293T
细胞后可包装出不同突变位点的“SARS
‑
CoV
‑
2S
蛋白假病毒盘”；根据化学发光仪检测细胞内的
RLU
，判断不同突变位点的假病毒感染能力强弱；在构建假病毒盘之前已经成功构建了
SAR S
‑
CoV
‑2易感细胞系
HEK293T/hACE2
；
S
蛋白假病毒盘构建成功后，对假病毒盘感染
HEK2...

【专利技术属性】
技术研发人员：高勇，丁承超，何军，刘志荣，谢佳佳，孙永，
申请(专利权)人：合肥市传染病医院合肥市第六人民医院安徽省疾病预防控制中心安徽省健康教育所，
类型：发明
国别省市：