一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备制造技术

本发明专利技术一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞

【技术实现步骤摘要】
一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备iPSCs的方法


[0001]本专利技术属于干细胞培养
，尤其涉及一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞
(bovine mammary epithelial cells
，
bMEC)
制备诱导性多能干细胞
(induced pluripotent stem cells
，
iPSCs)
的方法
。

技术介绍

[0002]2006
年，
Yamanaka
团队首次报道了通过四种转录因子
(OCT4、SOX2、KLF4
和
C
‑
MYC)
的过表达将体细胞重编程为
iPSCs
的方法
。
自此以后，研究者用牛的细胞进行了多次尝试，以期获得牛
iPSCs。
逆转录病毒和慢病毒载体在牛上的使用已经被广泛报道，异位表达
OCT4、KLF4、SOX2
和
C
‑
MYC
等转录因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备
iPSCs
的方法，其特征在于，包括以下步骤
:
步骤
A1、
维持牛多能性基因的逆转录病毒载体的构建；构建
pMXs
‑
Oct4、pMXs
‑
Sox2、pMXs
‑
Klf4、pMXs
‑
c
‑
Myc、pMXs
‑
Nanog
和
pMXs
‑
Lin28A
六种质粒；将构建好的质粒和
pMXsPuro
‑
GFP、pCMV
‑
VSV
‑
G
和
pUMVC
取上清做转化，用
DH5
α
大肠杆菌感受态进行转化，使用相应抗性的固体培养基培养，次日挑取菌落至对应抗性的液体培养基中扩增，使用大提质粒提取试剂盒提取质粒；步骤
A2、
逆转录病毒的构建；使用
HEK
‑
293T
细胞构建六种逆转录病毒，每种病毒由三种质粒构成，分别是目的质粒和包装质粒，包装质粒为
pCMV
‑
VSV
‑
G
和
pUMVC
；步骤
A3、
逆转录病毒感染
bMEC
；取提前一天铺有
Geltrex
的6孔板上状态良好的
bMEC
，加入六种病毒原液，每孔加入8μ
g/ml polybrene
，第二天将培养液更换成不含双抗的新鲜培养液，第三天再次用病毒原液再次感染细胞，第四天将培养液更换成不含双抗的新鲜培养液；步骤
A4、
牛
iPSCs
的获得；观察感染逆转录病毒的细胞状态，若状态良好，将培养液更换成诱导培养基，每两天换液，直到形成
biPSCs
克隆，即获得
biPSCs。2.
根据权利要求1所述的用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备
iPSCs
的方法，其特征在于，所述步骤
A2
中
HEK
‑
293T
细胞汇合至
80
％左右转染
。3.
根据权利要求1所述的用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备
iPSCs
的方法，其特征在于，所述步骤
A2
中加入质粒的比例为目的质粒：
PUMVC:pCMV
‑
VSV
‑
G
＝
20:3:2。4.
根据权利要求1所述的用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞制备
iPSCs
的方法，其特征在于，所述步骤
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学明，陈斓歆，姜禹，杨蕊，张博洋，朱春玲，王玥琦，张言，唐博，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：