【技术实现步骤摘要】
一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液及其应用
[0001]本专利技术涉及一种猪卵母细胞体外成熟培养液，具体为一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液及其应用，属于家畜繁殖技术应用领域
。
技术介绍
[0002]猪卵母细胞体外成熟培养
(IVM)
作为产生猪胚胎的方式之一，是家畜繁殖技术中的重要环节，体外成熟卵母细胞的质量影响了包括体外受精
、
孤雌激活和胚胎克隆在内的多个技术环节
。
由于现有的体外培养体系无法完全还原体内微环境，导致体外成熟的卵母细胞比之体内成熟的卵母细胞在成熟率
、
成熟质量和发育潜能存在明显差异，因此建立一种更稳定，卵母细胞成熟率更高的体外培养体系刻不容缓
。
[0003]目前，体外成熟过程中添加何种有益于卵母细胞发育的核心因子尚不明确，普遍认为有助于卵母细胞成熟的因子包括激素
、
生长因子
、
细胞因子和其他组分等
。
[0004]因此，提供一种猪卵母细胞体外...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液，其特征在于，包括基础培养液
、D
‑
半乳糖和松果菊苷，所述基础培养液以不含
HEPES
的
82.9
％体积分数的
M199
培养液为基础，添加
10
％体积分数的猪卵泡液，以及5％体积分数的胎牛血清，同时补充添加1％体积分数
6.9mg/mL
的
L
半胱氨酸
、0.1
％体积分数
10
μ
g/mL
的表皮生长因子
、1
％体积分数
10IU/mL
的促性腺激素和
10IU/mL
的绒毛膜促性激素的混合液，所述
D
‑
半乳糖的添加量为
9mg/mL
，所述松果菊苷的添加量为
39.337
μ
g/mL
或
78.673
μ
g/mL。
所述添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液的制备方法具体为：
SA、
在所述基础培养液中添加
9mg/mL
的
D
‑
半乳糖，建立猪卵母细胞的衰老体外培养液模型；
SB、
将
5mg
松果菊苷溶于
127.108
μ
L
的
DMSO
中获得
50mM
的浓储液，再利用
SA
中制备的所述猪卵母细胞的衰老体外培养液将
50mM
的松果菊苷浓储液分别稀释至
78.673
μ
g/mL、39.337
μ
g/mL
；
SC、
向
SA
中制备的所述猪卵母细胞的衰老体外培养液模型中添加
39.337
μ
g/mL
或
78.673
μ
g/mL
松果菊苷，最终得到添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液
。2.
根据权利要求1所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液，其特征在于：所述添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液中松果菊苷的添加量为
78.673
μ
g/mL。3.
根据权利要求1或权利要求2所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液，其特征在于：所述松果菊苷，其分子式为
C
35
H
45
O
20
，
其分子量为
786.73
，结构式如下：
4.
根据权利要求1所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液，其特征在于：所述猪卵泡液的制备具体为：取猪新鲜卵巢，置于
38.5℃
生理盐水保温瓶中，使用
18G
针头注射器抽取卵巢表面卵泡的卵泡液，将抽取的卵泡液收集于
15mL
离心管中并放置在
38.5℃
恒温箱中静置
30min
后，收集上层卵泡液
3000rpm
离心
30min
，下层为卵丘颗粒细胞卵母细胞复合体，将离心后的上清液用
0.22
μ
m
滤器过滤，将过滤后所得的猪卵泡液分装并
20℃
保存
。5.
根据权利要求4所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液，其特征在于：所述抽取卵巢表面卵泡的卵泡液过程中选择直径为2～
8mm
的卵泡
。6.
根据权利要求1所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液的应用
。7.
根据权利要求6所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液的应用，其特征在于：具体为松果菊苷在提高受损猪卵母细胞成熟率和发育质量中的应用
。8.
根据权利要求7所述的一种添加松果菊苷改善猪卵母细胞老化的培养液的应用，其特征在于：包括对猪卵母细胞卵丘扩张程度
、
猪卵母细胞
MII
时期第一极体外排以及猪卵母细胞成熟后纺锤体和染色体形态的研究，试验设计具体为，
对照组：不含
D
‑
半乳糖和松果菊苷的体外成熟培养液以不含<...
【专利技术属性】
技术研发人员：段星，来欣乐，席华明，李力枢，熊文杰，张金鑫，尚建洲，兰梦繁，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：
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