牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用，属于生物技术领域，所述牛卵母细胞的体外成熟培养液含有1×

【技术实现步骤摘要】
牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用
。

技术介绍

[0002]卵母细胞体外成熟培养是体外受精
、
体细胞核移植
、
动物胚胎体外生产和转基因克隆等胚胎工程技术的基础和关键环节
。
目前，优质种牛数量少
、
繁育速度慢
、
生产性能落后是制约养牛业健康
、
可持续发展的关键因素
。
牛的体外受精胚胎的细胞数明显低于体内胚胎，这反映了牛的体外培养体系还不理想，体外生产效率偏低，不能满足产业需求
。
[0003]影响卵母细胞体外成熟的因素包括卵母细胞的来源
、
培养液成分及其含量
、
添加物等
。
对于牛体外成熟和胚胎发育的研究是近几年的研究热点，但多集中于屠宰场来源卵母细胞的研究，对于牛活体采卵
(ovumpick up
，
OPU)
来源卵母细胞的研究较少
。
褪黑素
(melatonin
，
MT)
又名
N
‑
乙酰基
‑5‑
甲氧基色胺，是色氨酸的衍生物，由哺乳动物松果体合成并分泌的一种吲哚类激素
。
另外，褪黑素作为一种有效的
ROS
清除剂，具有抗氧化性，能为暴露在大量
ROS
下的细胞器提供保护作用
。
因此，提供一种含有褪黑素的体外成熟培养液以促进牛卵母细胞体外成熟
、
提高胚胎发育能力和妊娠率是目前亟待解决的技术问题
。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用，该体外成熟培养液能够促进牛卵母细胞体外成熟
、
提高胚胎发育能力和妊娠率
。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种牛卵母细胞的体外成熟培养液，所述牛卵母细胞体外成熟培养液含有1×
10
‑9～1×
10
‑7M
的褪黑素
。
[0007]优选的，所述牛卵母细胞体外成熟培养液由以下含量的成分组成：体积分数5％～
15
％的胎牛血清
、5
～
15
μ
g
·
mL
‑1促卵泡素
、0.5
～
1.5
μ
g
·
mL
‑1促黄体素
、0.5
～
1.5
μ
g
·
mL
‑1雌二醇
、90
～
110
μ
g
·
mL
‑1青霉素
、90
～
110
μ
g
·
mL
‑1链霉素
、1
×
10
‑9～1×
10
‑7M
的褪黑素和
TCM199
加至
100
％
。
[0008]优选的，所述褪黑素的浓度为1×
10
‑9M。
[0009]本专利技术还提供了一种牛卵母细胞体外成熟的方法，包括以下步骤：
[0010]将牛卵母细胞在上述的体外成熟培养液中进行体外成熟培养
。
[0011]优选的，所述牛卵母细胞为屠宰场来源的牛卵母细胞或牛活体采卵来源的牛卵母细胞
。
[0012]优选的，每
100
μ
L
的体外成熟培养液中含有
18
～
22
枚牛卵母细胞
。
[0013]优选的，所述培养时间为
22
～
24h。
[0014]本专利技术还提供了上述体外成熟培养液在提高牛胚胎发育能力和
/
或牛妊娠率中的
应用
。
[0015]本专利技术提供了一种褪黑素的应用，所述应用为以下中的至少一种：
[0016](1)
褪黑素在促进牛卵母细胞体外成熟中的应用；
[0017](2)
褪黑素在提高牛胚胎发育能力中的应用；
[0018](3)
褪黑素在提高牛妊娠率中的应用
。
[0019]优选的，所述褪黑素的浓度为1×
10
‑9～1×
10
‑7M。
[0020]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0021]本专利技术提供了一种牛卵母细胞的体外成熟培养液及其体外成熟的方法与应用，含有1×
10
‑9～1×
10
‑7M
褪黑素的体外成熟培养液处理牛卵母细胞后，囊胚数与囊胚率显著升高，可以促进牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育，对移植后妊娠率也有积极作用，可有效改善牛体外胚胎生产效率
。
本专利技术为牛卵母细胞体外成熟体系提供新思路，为进一步提高牛体外胚胎生产效率提供参考
。
附图说明
[0022]图1为不同处理组对屠宰场牛卵母细胞成熟扩展及胚胎发育的影响，其中第一行为不同处理组对屠宰场牛卵母细胞成熟扩展的影响，第二行为不同处理组对牛胚胎发育的影响
。
具体实施方式
[0023]本专利技术提供了一种牛卵母细胞的体外成熟培养液，所述在牛卵母细胞体外成熟培养液含有1×
10
‑9～1×
10
‑7M
的褪黑素
。
[0024]本专利技术通过在牛卵母细胞成熟过程中，在培养液中添加不同浓度的褪黑素
(melatonin
，
MT)
观察统计屠宰场卵母细胞体外受精后胚胎的卵裂率
、
囊胚率，研究发现，含有1×
10
‑
10
M
褪黑素的体外成熟培养液与不含1×
10
‑
10
M
褪黑素的体外成熟培养液相比，含有1×
10
‑
10
M
褪黑素的体外成熟培养液对牛卵母细胞无积极影响，而本专利技术利用含有1×
10
‑9～1×
10
‑7M
褪黑素的体外成熟培养液处理牛卵母细胞，有效地促进卵母细胞体外成熟，提升生产中卵母细胞的质量与后期胚胎发育能力，从而提高了牛的妊娠率
。
所述牛的品种优选为荷斯坦奶牛
。
[0025]在本专利技术中，所述褪黑素的制备：称取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种牛卵母细胞的体外成熟培养液，其特征在于，所述牛卵母细胞体外成熟培养液含有1×
10
‑9～1×
10
‑7M
的褪黑素
。2.
根据权利要求1所述的体外成熟培养液，其特征在于，所述牛卵母细胞体外成熟培养液由以下含量的成分组成：体积分数5％～
15
％的胎牛血清
、5
～
15
μ
g
·
mL
‑1促卵泡素
、0.5
～
1.5
μ
g
·
mL
‑1促黄体素
、0.5
～
1.5
μ
g
·
mL
‑1雌二醇
、90
～
110
μ
g
·
mL
‑1青霉素
、90
～
110
μ
g
·
mL
‑1链霉素
、1
×
10
‑9～1×
10
‑7M
的褪黑素和
TCM199
加至
100
％
。3.
根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李喜和，孙伟，郭雅欣，赵勇超，张浩波，王超，
申请(专利权)人：内蒙古赛科星繁育生物技术集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：