一种具有制造技术

本发明专利技术属于食源性活性肽开发技术领域，具体涉及一种具有

【技术实现步骤摘要】
一种具有DPP
‑
IV抑制活性的苦荞肽及其应用


[0001]本专利技术属于食源性活性肽开发
，特别涉及一种具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽及其应用
。

技术介绍

[0002]二肽基肽酶Ⅳ（
DPP
‑
IV
）是调控血糖的重要靶点
。
在人体内
DPP
‑
IV
具有降解胰高糖素样肽
‑1（
GLP
‑1）的作用，阻碍了
GLP
‑1发挥降低血糖的活性，从而使血糖失去控制
。
因此，
DPP
‑
IV
抑制剂的研发成为治疗Ⅱ型糖尿病的重要途径
。
来源于谷物蛋白的活性肽的调控血糖作用已被证实与
DPP
‑
IV
酶抑制活性密切相关
。
[0003]食源性
DPP
‑
IV
抑制肽主要来源于动物
、
植物及乳制品
。
从沙丁鱼蛋白中鉴定出
DPP
‑
IV
抑制肽
DTMYDT
的
IC50
为
1.83 mg/mL
；大西洋鲑鱼皮蛋白来源的
DPP
‑
IV
抑制肽
LDKVFR
的
IC50
为
128.71 μ
mol/L。
而乳制品中筛选出的肽，均具有较高的
DPP
‑
IV
抑制活性
。
从牛
α
‑
乳清蛋白中鉴定出
DPP
‑
IV
抑制肽
ILDKVGINY
的
IC50
为
1.0 mg/mL。
特别是酪蛋白中的
DPP
‑
IV
抑制肽活性最强的是
IPI
，其
IC50
在
3.2
‑
7.40 μ
mol/L。
相比动物蛋白，植物蛋白来源更广，价格经济，生长周期短，且属于可再生能源，是食源性
DPP
‑
IV
抑制肽的一种优质来源
。
[0004]已有报道，藜麦蛋白筛选出的
DPP
‑
IV
抑制肽混合物的
IC50
为
0.23 mg/mL
‑
0.98 mg/mL
，纯化出活性最强的
HPF
的
IC50
最低可达
13.69 μ
g/mL
；燕麦蛋白筛选出的
DPP
‑
IV
抑肽混合物的
IC50
为
0.68 mg/mL
‑
0.99 mg/mL
，纯化出活性最强的
LQAFEPLR
的
IC50
最低可达
103.5 μ
mol/L。
然而，苦荞蛋白源的多肽对
DPP
‑
IV
抑制活性未知，其影响活性的分子量分布及活性序列也不清楚
。
本申请以苦荞粉为主要来源，筛选纯化出具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，
RLSIRPP
和
LHIVGPDK
；并通过对接分析证明苦荞肽与
DPP
‑
IV
酶有7个氢键残基关联和4个疏水相互作用残基关联；此外通过酶抑制动力学分析，证明苦荞肽抑制
DPP
‑
IV
酶为竞争性和非竞争性混合型抑制类型
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术的目的是为了获得具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，用于以降血糖为目的的保健食品
、
药品的开发
。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供一种具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，所述多肽的氨基酸序列为：
RLSIRPP
，如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0007]本专利技术还提供一种具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，所述多肽的氨基酸序列为：
LHIVGPDK
，如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0008]本专利技术提供一种苦荞肽的制备方法，采用如下方法制备：（1）苦荞蛋白制备：将苦荞粉和石油醚混合，获得脱脂苦荞粉，然后再通过
pH
调节
、
透析
、
除盐
、
干燥，获得苦荞蛋白；（2）苦荞蛋白酶解：采用
4%
复合酶对
pH7
，
2%
苦荞蛋白进行酶解；
（3）苦荞肽复合物提取：将（2）反应后溶液煮沸，灭活蛋白酶，离心收集上清，获得苦荞肽粗提物；（4）苦荞肽分离纯化：采用超滤和液相色谱分离纯化，然后结合
Nano LC
‑
MS/MS
测序，确定苦荞肽组成
。
[0009]所述苦荞肽为
RLSIRPP
和
LHIVGPDK。
[0010]具体的制备方法为：（1）苦荞蛋白（
PO
）制备：将苦荞粉与石油醚按
1:5
料液比混合，室温
600 rpm
搅拌
1 h
，经减压抽滤并干燥后得脱脂苦荞粉，然后按照
10%
加入水中，调节
pH
至7‑
13
，搅拌
1 h
，
6000 rpm
离心
5 min
得上清蛋白液
。
调节上清蛋白液
pH
至
4.5
，
6000 rpm
离心
5 min
，后收集
PO
沉淀
。
沉淀用水复溶，调节
pH
为7，经透析
24 h
，除去盐离子，再经干燥，获得
PO。
[0011]（2）
PO
酶解：
2%
的
PO
溶液调整
pH=7
，充分搅拌
1 h
，煮沸
15 min
后与
4%
复合酶（中性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：
RLSIRPP
，如
SEQ ID NO.2
所示
。2.
一种具有
DPP
‑
IV
抑制活性的苦荞肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：
LHIVGPDK
，如
SEQ ID NO.3
所示
。3.
一种苦荞肽的制备方法，其特征在于，采用如下方法制备：（1）苦荞蛋白制备：将苦荞粉和石油醚混合，获得脱脂苦荞粉，然后再通过
pH
调节
、
透析
、
除盐
、
干燥，获得苦荞蛋白；（2）苦荞蛋白酶解：采用
4%
复合酶对
pH7
，
2%
苦荞蛋白进行酶解；（3）苦荞肽复合物提取：将（2）反应后溶液煮沸，灭活蛋白酶，离心收集上清，获得苦荞肽粗提物；（4）苦荞肽分离纯化：采用超滤和液相色谱分离纯化，然后结合
Nano LC
‑
MS/MS
测序，确定苦荞肽组成
。4.
如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：仇菊，吴伟菁，王立博，吴兰兰，郭子聪，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：