肺癌类器官及其培养方法和应用以及肺癌类器官培养基及其制备方法技术

本申请公开了一种肺癌类器官及其培养方法和应用以及肺癌类器官培养基及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
肺癌类器官及其培养方法和应用以及肺癌类器官培养基及其制备方法


[0001]本本专利技术涉及生物工程领域，更具体地说，涉及一种肺癌类器官及其培养方法和应用以及肺癌类器官培养基及其制备方法
。

技术介绍

[0002]肺癌是目前造成病人死亡的常见肿瘤之一，在不同个体之间表现出巨大的遗传和表型异质性
。
因此，肺癌的全程管理需要依靠精准医学的手段
。
近年来的研究表明，除肿瘤细胞外，肿瘤微环境也是肿瘤发展的重要原因
。
目前，体外培养的细胞系，细胞种类单一很难模拟体内肿瘤的生长模式
。
[0003]肺癌类器官，直接来源于病人的肺癌组织，更能体现病人特有的肿瘤组织的生物学特性，可在短时间内大量扩增，为精准治疗提供了新的技术手段
。
目前，肺癌类器官存在生长速度缓慢和传代后细胞无法复苏的问题
。
除此，病人来源的肺癌类器官培养过程中容易污染，培养成功率低
。
现有的肺癌类器官培养基存在配置过程复杂或因添加成分的储藏温度不同，造成培养基过期浪费等问题
。
[0004]因此，提高肺癌类器官培养成功率和生长速度是肺癌类器官培养领域需要解决的问题
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请提出了一种肺癌类器官及其培养方法和应用以及肺癌类器官培养基及其制备方法
。
[0006]根据本申请的第一个方面，提供了一种肺癌类器官培养基，包括基础培养基
、
>条件培养基和特异性添加因子，所述肺癌类器官培养基中不包含血清，其中，所述特异性添加因子包括：
HGF
和
/
或
VEGF。
[0007]具体地，所述
VEGF
为
VEGF
‑
A、VEGF
‑
B、VEGF
‑
C、VEGF
‑
D、VEGF
‑
E
和
VEGF
‑
F
中的至少一种，优选地，所述的
VEGF
‑
A
为
VEGF 165、VEGF 145、VEGF110、VEGF183、VEGF209、VEGF 121
和
VEGF 189
中的至少一种；和
/
或所述基础培养基为
DMEM/F12
培养基
、DMEM
培养基
、RPMI
‑
1640
培养基
、MEM
培养基
、BME
培养基
、IMDM
培养基
、Ham's F
‑
10
培养基
、199
培养基
、McCoy5A
培养基和
L15
培养基中的至少一种；和
/
或所述条件培养基为
R
‑
Spondin 1
条件培养基
、Noggin
条件培养基和
Wnt3a
条件培养基中的至少一种；和
/
或所述特异性添加因子为
EGF、
成纤维细胞生长因子
、ROCK
抑制剂
、P38
‑
MAPK
抑制剂
、TGF
β
抑制剂
、ROS
抑制剂
、B27、Nicotinamide、GlutaMax
和
Hepes
中的至少一种，优选地，所述成纤维细胞生长因子为
FGF 1、FGF 2、FGF 4、FGF 5、FGF 6、FGF 3、FGF 7、FGF 10、FGF 22、FGF 8、FGF 17、FGF 18、FGF 9、FGF 16、FGF 20、FGF 19、FGF 21
和
FGF 23
中的至少一种，更优选地，所述成纤维细胞生长因子为
FGF 2、FGF 7
和
FGF 10
中的至少一种
。
[0008]具体地，所述特异性添加因子包括以下浓度的组分：
10
‑
100ng/mL HGF、10
‑
100ng/
mLVEGF、10
‑
100ng/mL EGF、10
‑
100ng/mLFGF 2、10
‑
100ng/mL FGF 7、10
‑
100ng/mL FGF 10、2
‑
10
μ
M ROCK
抑制剂
、0.5
‑
10
μ
MP38
‑
MAPK
抑制剂
、0.1
‑1μ
M TGF
β
抑制剂
、0.5
‑
2mM ROS
抑制剂
、0.5
‑
2x B27、2
‑
20mM Nicotinamide、0.5
‑
2x GlutaMax
和
0.1
‑
3x Hepes。
[0009]优选地，所述特异性添加因子包括以下浓度的组分：
20
‑
80ng/mLHGF、20
‑
80ng/mLVEGF、20
‑
80ng/mL EGF、20
‑
80ng/mL FGF 2、20
‑
80ng/mL FGF 7、20
‑
80ng/mL FGF 10、3
‑9μ
M ROCK
抑制剂
、1
‑9μ
M P38
‑
MAPK
抑制剂
、0.2
‑
0.8
μ
M TGF
β
抑制剂
、0.8
‑
1.6mM ROS
抑制剂
、0.8
‑
1.6x B27、4
‑
18mM Nicotinamide、0.6
‑
1.8x GlutaMax
和
0.5
‑
2.5x Hepes。
[0010]优选地，所述特异性添加因子包括以下浓度的组分：
30
‑
70ng/mLHGF、30
‑
70ng/mLVEGF、30
‑
70ng/mL EGF、30
‑
70ng/mL FGF 2、30
‑
70ng/mL FGF 7、30
‑
70ng/mL FGF 10、4
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种肺癌类器官培养基，其特征在于，包括基础培养基
、
条件培养基和特异性添加因子，所述肺癌类器官培养基中不含血清，其中，所述特异性添加因子包括：
HGF
和
/
或
VEGF。2.
根据权利要求1所述的肺癌类器官培养基，其特征在于，所述
VEGF
为
VEGF
‑
A、VEGF
‑
B、VEGF
‑
C、VEGF
‑
D、VEGF
‑
E
和
VEGF
‑
F
中的至少一种，优选地，所述
VEGF
‑
A
为
VEGF 165、VEGF 145、VEGF110、VEGF183、VEGF209、VEGF 121
和
VEGF 189
中的至少一种；和
/
或所述基础培养基为
DMEM/F12
培养基
、DMEM
培养基
、RPMI
‑
1640
培养基
、MEM
培养基
、BME
培养基
、IMDM
培养基
、Ham's F
‑
10
培养基
、199
培养基
、McCoy5A
培养基和
L15
培养基中的至少一种；和
/
或所述条件培养基为
R
‑
Spondin 1
条件培养基
、Noggin
条件培养基和
Wnt3a
条件培养基中的至少一种；和
/
或所述特异性添加因子为
EGF、
成纤维细胞生长因子
、ROCK
抑制剂
、p38
‑
MAPK
抑制剂
、TGF
β
抑制剂
、ROS
抑制剂
、B27、Nicotinamide、GlutaMax
和
Hepes
中的至少一种，优选地，所述成纤维细胞生长因子为
FGF 1、FGF 2、FGF 4、FGF 5、FGF 6、FGF 3、FGF 7、FGF 10、FGF 22、FGF 8、FGF 17、FGF 18、FGF 9、FGF 16、FGF 20、FGF 19、FGF 21
和
FGF 23
中的至少一种，更优选地，所述成纤维细胞生长因子为
FGF 2、FGF 7
和
FGF 10
中的至少一种
。3.
根据权利要求1或2所述的肺癌类器官培养基，其特征在于，所述特异性添加因子包括以下浓度的组分：
10
‑
100ng/mL HGF、10
‑
100ng/mL VEGF、10
‑
100ng/mL EGF、10
‑
100ng/mL FGF 2、10
‑
100ng/mL FGF 7、10
‑
100ng/mLFGF 10、2
‑
10
μ
M ROCK
抑制剂
、0.5
‑
10
μ
M p38
‑
MAPK
抑制剂
、0.1
‑1μ
M TGF
β
抑制剂
、0.5
‑
2mM ROS
抑制剂
、0.5
‑
2x B27、2
‑
20mM Nicotinamide、0.5
‑
2x GlutaMax
和
0.1
‑
3x Hepes
；优选地，所述特异性添加因子包括以下浓度的组分：
20
‑
80ng/mLHGF、20
‑
80ng/mLVEGF、20
‑
80ng/mL EGF、20
‑
80ng/mL FGF 2、20
‑
80ng/mL FGF 7、20
‑
80ng/mLFGF 10、3
‑9μ
M ROCK...

【专利技术属性】
技术研发人员：王倩，苗春光，许心悦，郭自云，钟蔚桢，
申请(专利权)人：安徽骆华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：