检测大肠杆菌制造技术

本发明专利技术公开了检测大肠杆菌

【技术实现步骤摘要】
检测大肠杆菌H7抗原的杂交瘤细胞及单抗和应用


[0001]本专利技术涉及检测领域，具体涉及检测大肠杆菌
H7
抗原的杂交瘤细胞，还涉及由该杂交瘤细胞分泌的单抗和在制备检测试剂中的应用
。

技术介绍

[0002]肠出血性大肠杆菌
(Enterohemorrhagic E.coli,EHEC)
是大肠杆菌的一个致病亚型，其中主要致病菌株为
O157:H7
血清型，可引起严重食物中毒的感染性腹泻，并引起严重的出血性肠炎而得名
。O157:H7
大肠杆菌具有感染剂量极低，潜伏期短等特点，其感染后会引发突然的剧烈腹痛和水样腹泻，数天后出现出血性腹泻，并可能发生溶血性尿毒综合症
、
血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症，若不及时准确干预治疗，随着病情发展死亡率高
,
给人民健康和社会造成严重危害
。EHEC
感染在世界多地均有报道，并在欧美国家有严重爆发流行病例，因此得到世界各国卫生行政部门和临床医生的高度重视
。
[0003]EHEC O157:H7
主要通过食源性途径传播，其次为水源和接触传播，其感染传播严重危害着食品安全及人类健康，但目前还缺少有效地治疗手段，因此对
O157:H7
的预防控制，特别是病原菌的检测就显得尤为重要
。
我国进出口食品对
E.coli O157:H7
检测采用的方法是以行业标准
SNT0973/>‑
2010
作为依据
。
常规检测过程是对样品增菌处理后，进行平板划线培养，然后挑取可疑菌落进行形态
、
染色及血清学试验
、
生化鉴定等进行判定，该检测过程耗时长达4‑
7d
，难以适应快速检验的要求
。
因此，需要有一种操作简便
、
结果准确可靠
、
可快速检测大肠杆菌
O157:H7
血清型的试剂
。
[0004]大肠杆菌有着复杂的抗原系统，包括
O
抗原
(
菌体抗原
)、K
抗原
(
荚膜抗原
)、H
抗原
(
鞭毛抗原
)、F
抗原
(
菌毛抗原
)
，这些抗原成分与大肠杆菌致病和分型有着重要关系
。
其中
O
抗原和
H
抗原为大肠杆菌血清型主要的鉴定抗原，
O157
菌体抗原和
H7
鞭毛抗原对
EHEC
菌的鉴定至关重要
。
为了准确特异的检出
O157:H7
血清型大肠杆菌，就需要优质的大肠杆菌
O157
和
H7
单克隆抗体，但目前市面上还缺乏特异灵敏的
H7
单克隆抗体，这对
O157:H7
免疫诊断带来一定困难
。
因此，开发优质的大肠杆菌
O157:H7
单克隆抗体具有重要的应用市场价值和临床意义
。
[0005]特异灵敏的配对抗体可广泛应用于胶体金试纸
、ELISA、
电化学发光等不同用途的免疫学试验
。
其中胶体金检测试纸条检测大肠杆菌
O157:H7
感染，不需要昂贵的设备和训练有素的专业人员，非常适合临床疑似患者快速诊断及食品安全相关快速检测，提高了检测时效性和便捷性
。
胶体金免疫层析法检测抗原多采用双抗体夹心法，利用免疫金标记技术，以微孔膜为固相载体，实现对样品的定性或半定量检测
。
首先将已知的特异性单抗或多抗包被于
NC
膜上作为检测线
(T)
，可与金标抗体结合的二抗包被于
NC
膜上作为质控带
(C
线
)。
与包被抗体相配对的另一单抗与胶体金结合，吸附于金标垫作为检测信号
。
干燥的金标垫一端与膜相接，一端与样品垫相连
。
膜的另一侧粘贴吸水垫
。
检测时，样品垫上加入液体样品通过毛细管作用向吸水垫的方向移动，经过金标垫时，如标本中有待测抗原，则发生抗原抗体反应，形成金颗粒－抗体－抗原复合物；样本继续移动到达检测带位置，则与针对不同
检测位点的包被抗体再次发生抗原抗体反应，形成金颗粒－抗体－抗原－包被抗体复合物，形成肉眼可见的
T
线，如样本中无待检抗原或待检抗原的浓度低于检测范围，则不能形成肉眼可见的红色条带
。
游离的金标结合物或金颗粒－抗体－抗原复合物越过检测带到达质控带，与二抗发生反应，聚集并产生肉眼可见的红色条带
(C
线
)。
无论样本中是否含有待检物质，质控带都会出现
C
线
。
[0006]胶体金免疫层析法可对样品进行单份检测，具有操作便捷
、
不需要特殊设备和场地的优点
。
但目前免疫结合胶体金层析法普遍存在一定缺陷，如对样本的敏感度低，质量控制能力不够，批间
、
批内和不同试剂间变异系数过大等
。
因此，提高单克隆抗体配对的敏感度和特异性，是弥补免疫结合胶体金层析法缺陷的重要手段
。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种检测大肠杆菌
H7
抗原单克隆抗体杂交瘤细胞
ID2
；本专利技术的目的之二在于提供所述杂交瘤细胞
ID2
分泌的单克隆抗体
ID2
；本专利技术的目的之三在于提供所述单克隆抗体
ID2
在制备检测大肠杆菌
H7
抗原的检测试剂中的应用；本专利技术的目的之四在于提供含有所述单克隆抗体
ID2
的检测试剂
。
[0008]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]1、
检测大肠杆菌
H7
抗原单克隆抗体杂交瘤细胞
ID2
，所述杂交瘤细胞
ID2
保藏编号为
GDMCC No
：
63530
，保藏日期为
2023
年
06
月
06
日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心
。
[0010]2、
所述杂交瘤细胞
ID2
分泌的单克隆抗体
ID2。
[0011]3、
所述单克隆抗体
ID2
在制备检测大肠杆菌
H7
抗原的检测试剂中的应用<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
检测大肠杆菌
H7
抗原单克隆抗体杂交瘤细胞
ID2
，其特征在于：所述杂交瘤细胞
ID2
保藏编号为
GDMCC No
：
63530
，保藏日期为
2023
年
06
月
06
日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心
。2.
权利要求1所述杂交瘤细胞
ID2
分泌的单克隆抗体
ID2。3.
权利要求2所述单克隆抗体
ID2
在制备检测大肠杆菌
H7
抗原的检测试剂中的应用
。4.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法
、
免疫荧光层析法
、
酶联免疫法或化学发光法
。5.
含有权利要求2所述单克隆抗体
ID2
的检测试剂
。6.
根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法
。7.
根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂含有胶体金试纸条，所述胶体金试纸条包括样品垫
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑建，张娟，袁作为，国锦琳，周丹丹，
申请(专利权)人：重庆市中医院成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：