一种高产菌体蛋白米曲霉菌株及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种高产菌体蛋白米曲霉菌株，分类命名为米曲霉菌株

【技术实现步骤摘要】
一种高产菌体蛋白米曲霉菌株及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高产菌体蛋白米曲霉菌株及其应用
。

技术介绍

[0002] 为缓解动物蛋白生产面临的环境资源压力，解决人口增长可能导致的动物蛋白供应缺口，近年来，全球对动物替代蛋白的需求呈持续上升趋势
。
植物蛋白
、
微生物蛋白以及动物细胞培养蛋白作为动物替代蛋白备受关注
。
菌体蛋白又称微生物蛋白，是指细菌
、
酵母
、
霉菌
、
微藻等在其生长过程中利用各种基质， 在适宜的培养条件下培养细胞或丝状微生物的个体而获得的蛋白，可食用
。
而从微生物要蛋白， 不仅可以降低
CO2排放量， 而且可以大大提高蛋白生产效率
。
米曲霉作为国家可食用开发菌种，其安全性得到了保证，选育高产菌体蛋白米曲霉菌株成为替代动物蛋白
、
进一步开发未来食品的关键
。
[0003]诱变筛选作为一种传统的非理性菌种选育技术，主要有物理诱变
、
化学诱变等，被广泛应用于菌株选育
。
但具有工作量大，筛选过程复杂等问题
。
常温常压等离子体（
ARTP
）诱变育种技术是近年来应用非常广泛的育种手段，由于其具有射流温度低（
25~35 ℃
），活性粒子分布均匀，操作简便，安全性高等特点，被广泛应用于细菌
、
真菌等领域
。
[0004]诱变的最终目的是为了得到高产菌体蛋白米曲霉的菌株，并将其作为菌体蛋白原料应用于食品
。

技术实现思路

[0005]基于以上技术问题，本专利技术通过
ARTP
诱变技术对米曲霉
DM3
菌株（来源于霉豆瓣分离纯化）进行处理，将诱变菌株在摇瓶中培养一定菌浓后接入
48
深孔板中，通过考马斯亮蓝方法进行筛选，对比原始菌株即空白观察吸光度变化，初步筛选出含产蛋白能力强的菌悬液，再通过凯氏定氮法对初筛出的菌株进行复筛，并对其遗传稳定性和蛋白含量开展研究，为后续的发酵培养优化提供了优良菌株基础
。
[0006]本专利技术的技术方案提供一种高产菌体蛋白米曲霉诱变菌株，该诱变菌株是以米曲霉
DM3
诱变的菌株，该诱变菌株能在培养基中生长并表达合成菌体蛋白
。
[0007]一株高产菌体蛋白米曲霉菌株，分类命名为米曲霉菌株
Aspergillus oryzaeC1
，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：
CCTCC NO: M 20231260
，保藏日期：
2023
年7月
10
日，保藏地址：中国武汉武汉大学
。
[0008]所述的高产菌体蛋白米曲霉菌株
Aspergillus oryzaeC1
在生产菌体蛋白上的应用
。
[0009]一种产菌体蛋白的方法，将米曲霉菌株
Aspergillus oryzaeC1
接种于种子液中进行培养，培养后的产物再接种于发酵培养基中进行培养，得到菌体蛋白
。
[0010]种子液的组分为葡萄糖
20
‑
35g/L
，酵母抽提物
10
‑
20g/L
，七水和硫酸镁
0.5
‑
1.5g/L、
磷酸二氢钾
0.3
‑
0.8g/L
作为优选方案，种子液的组分为葡萄糖
30g/L
，酵母抽提物
18g/L
，七水和硫酸镁
1g/L、
磷酸二氢钾
0.5g/L。
[0011]接种于发酵培养基的接种量为1‑
5wt%。
[0012]发酵培养基组为葡萄糖
20
‑
35g/L
，酵母抽提物
10
‑
20g/L
，七水和硫酸镁
0.5
‑
1.5g/L、
磷酸二氢钾
0.3
‑
0.8g/L
作为优选方案，所述的发酵培养基组分为葡萄糖
30g/L
，酵母抽提物
18g/L
，七水和硫酸镁
1g/L、
磷酸二氢钾
0.5g/L。
[0013]本专利技术的技术方案将
ARTP
技术结合
48
孔板培养
、
考马斯蓝法
、
凯氏定氮法，快速高效的诱变米曲霉
DM3
菌株，该过程中，将诱变后的菌液先通过摇瓶培养扩大，再通过
48
深孔板培养将含有多个突变孢子菌液分散培养至一定时间，通过菌体洗涤
、
破碎释放胞内蛋白，利用考马斯亮蓝方法特性通过吸光度大小，判断菌体产蛋白能力，吸光度较空白高的即说明该菌体中含正突变菌，进而筛选出含正突变菌的菌悬液，再进一步通过单菌分离，进行单菌的凯氏定氮法复筛
。
筛选出蛋白含量提高
20%
以上
15
株，
30%
以上菌株7株，得到的米曲霉
C1
菌株蛋白含量最高达
54%。
[0014]本专利技术的技术方案将
ARTP
随机诱变技术结合
48
孔板培养再与考马斯蓝法初筛
、
凯氏定氮法复筛相结合，增大诱变菌株高产菌体蛋白能力方向突变的几率，使筛选到优良菌株的概率升高，减少筛选的工作量，为微生物优势菌株筛选提供了有益的方法
。
附图说明
[0015]图1为米曲霉
DM3 ARTP
致死率曲线
。
[0016]图2为考马斯亮蓝测蛋白初筛含正突变菌的菌体破碎液与原始菌株菌体破碎液蛋白含量图
。
[0017]图3为凯氏定氮法复筛测蛋白诱变菌株与原始菌株蛋白含量图
。
[0018]图4为
C1
菌株连续传代7次凯氏定氮法检测其蛋白含量图
。
具体实施方式
[0019]实施例
1ARTP
诱变 将培养至对数中后期的种子液用生理盐水稀释至
OD
600
值为
0.3
的菌悬液，振荡重悬2‑3次，加入
5%
甘油，备用
。
将
ARTP
的温度保持在
20 ℃
，调节功率为
120 W
，氦气（
He
）流量为
10 L/min。
吸取
10
μ
L
菌悬液均匀涂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株高产菌体蛋白米曲霉菌株，分类命名为米曲霉菌株
Aspergillus oryzae C1
，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：
CCTCC NO: M 20231260
，保藏日期：
2023
年7月
10
日，保藏地址：中国武汉武汉大学
。2.
权利要求1所述的高产菌体蛋白米曲霉菌株
Aspergillus oryzae C1
在生产菌体蛋白上的应用
。3.
一种产菌体蛋白的方法，其特征在于，将米曲霉菌株
Aspergillus oryzae C1
接种于种子液中进行培养，培养后的产物再接种于发酵培养基中进行培养，得到菌体蛋白
。4.
根据权利要求3所述的产菌体蛋白的方法，其特征在于，种子液的组分为葡萄糖
20
‑
35g/L
，酵母抽提物
10
‑
20g/L
，七水和硫酸镁
0.5
‑
1.5g/L、
磷酸二氢钾
0.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂璇，杜明樾，龚大春，李库，
申请(专利权)人：安琪酵母股份有限公司，
类型：发明
国别省市：