一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温制造技术

本发明专利技术提供了一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温

【技术实现步骤摘要】
一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温80含量的方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，涉及一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法
。

技术介绍

[0002]聚山梨酯
(PS
，即吐温
)
是一类两亲性，非离子表面活性剂家族，其来自被脂肪酸酯化的乙氧基化脱水山梨糖醇或异山梨醇
(
山梨糖醇的衍生物
)。
聚山梨酯，特别是聚山梨酯
20(PS20)
和聚山梨酯
80(PS80)
，是生物药物制剂中使用最广泛的表面活性剂，可防止蛋白质在储存过程中变性
、
聚集
、
表面吸附和絮凝
。
作为蛋白质稳定剂的聚山梨酸酯是化学上多样化的混合物，并且可以通过氧化和水解途径降解，其中水解途径是化学诱导的或酶催化的
。
由于聚山梨酯降解可能会无意中影响蛋白质制剂的质量
、
功效
、
安全性和稳定性，因此，需要药企在产品的货架期内聚山梨酯的含量及对产品质量的影响进行监控
。
聚山梨酯结构缺乏强发色团，无法检测到容易获得的紫外可见光和荧光
。
[0003]目前，用于检测吐温
80
含量的方法主要有比色法
、
高效液相色谱
‑
蒸发光散射
(HPLC
‑
ELSD)
检测法
、
水解法
、
质谱法等
。
比色法因对设备要求比较低而应用广泛，但该方法耗时
、
重复性较差，且对蛋白浓度较高样品适用性差；
HPLC
‑
ELSD
法检测结果较准确，应用范围较广，但是
ELSD
系统易受蛋白污染而影响检测结果：水解法是将吐温
80
水解成油酸，利用高效液相色谱
‑
紫外检测器检测，该方法耗时较长，易受油酸稳定性的影响：质谱法需要使用昂贵的仪器，因此使用范围受限
。
[0004]综上，蛋白样本中吐温
80
的含量检测中，如何消除蛋白的影响，从而准确检测吐温
80
的含量，是本领域重点要解决的问题
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法
。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法，所述方法包括：分别将蛋白类药物的待测样品及蛋白类药物的阴性样品进行高效液相色谱检测，利用待测样品测得的色谱峰面积扣减掉阴性样品测得的色谱峰面积，得到差值，利用外标法定量，计算得到待测蛋白类药物中吐温
80
的含量
。
[0008]优选地，所述外标法定量包括：对系列浓度的吐温
80
标准溶液进行高效液相色谱检测，绘制吐温
80
的浓度与色谱峰面积之间的标准曲线，将扣减得到的差值代入标准曲线中，计算得到蛋白类药物待测样品中吐温
80
的含量
。
[0009]优选地，所述吐温
80
标准溶液的浓度范围为
0.001
‑
0.1
％
(w/v)。
[0010]优选地，所述高效液相色谱检测中所用流动相中含有氯化钠
0.1
‑
0.2M、
四硼酸钠
0.02
‑
0.03M、
乙腈4‑
6wt
％
、N
‑
苯基
‑1‑
萘胺4‑6μ
M
和吐温
80 2
‑
3ppm。
[0011]上述
0.1
‑
0.2M
中的具体数值例如
0.1M、0.11M、0.12M、0.13M、0.14M、0.15M、0.16M、0.17M、0.18M、0.19M、0.2M
等
。
[0012]上述
0.02
‑
0.03M
中的具体数值例如
0.02M、0.021M、0.022M、0.023M、0.024M、0.025M、0.026M、0.027M、0.028M、0.029M、0.03M
等
。
[0013]上述4‑
6wt
％中的具体数值例如
4wt
％
、4.1wt
％
、4.2wt
％
、4.3wt
％
、4.4wt
％
、4.5wt
％
、4.6wt
％
、4.7wt
％
、4.8wt
％
、4.9wt
％
、5wt
％
、5.1wt
％
、5.2wt
％
、5.3wt
％
、5.4wt
％
、5.5wt
％
、5.6wt
％
、5.7wt
％
、5.8wt
％
、5.9wt
％
、6wt
％等
。
[0014]上述4‑6μ
M
中的具体数值例如4μ
M、4.1
μ
M、4.2
μ
M、4.3
μ
M、4.4
μ
M、4.5
μ
M、4.6
μ
M、4.7
μ
M、4.8
μ
M、4.9
μ
M、5
μ
M、5.1
μ
M、5.2
μ
M、5.3
μ
M、5.4
μ
M、5.5
μ
M、5.6
μ
M、5.7
μ
M、5.8
μ
M、5.9
μ
M、6
μ
M
等
。
[0015]上述2‑
3ppm
中的具体数值例如
2ppm、2.1ppm、2.2ppm、2.3ppm、2.4ppm、2.5ppm、2.6ppm、2.7ppm、2.8ppm、2.9ppm、3ppm
等
。
[0016]优选地，所述高效液相色谱检测采用等度洗脱方式
。
[0017]优选地，所述高效液相色谱检测中，流速为1‑
2mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法，其特征在于，所述方法包括：分别将蛋白类药物的待测样品及蛋白类药物的阴性样品进行高效液相色谱检测，利用待测样品测得的色谱峰面积扣减掉阴性样品测得的色谱峰面积，得到差值，利用外标法定量，计算得到待测蛋白类药物中吐温
80 的含量
。2.
如权利要求1所述的基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法，其特征在于，所述外标法定量包括：对系列浓度的吐温
80
标准溶液进行高效液相色谱检测，绘制吐温
80
的浓度与色谱峰面积之间的标准曲线，将扣减得到的差值代入标准曲线中，计算得到蛋白类药物待测样品中吐温
80
的含量
。3.
如权利要求1或2所述的基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测中所用流动相中含有氯化钠
0.1
‑
0.2M、
四硼酸钠
0.02
‑
0.03M、
乙腈4‑6％
、N
‑
苯基
‑1‑
萘胺4‑6μ
M
和吐温
80 2
‑
3ppm。4.
如权利要求1‑3中任一项所述的基于直接扣减法检测蛋白类药物中吐温
80
含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测采用等度洗脱方...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴彬，潘有文，王晶晶，徐张晔，
申请(专利权)人：无锡药明生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：