利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法

【技术实现步骤摘要】
利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法
。

技术介绍

[0002]随着分子生物技术快速发展，特别是转基因技术的出现，给植物育种带来新的技术手段
。
转基因拷贝数是影响目的基因表达水平和遗传稳定性的重要因素，因此，检测转入目标基因的拷贝数是转基因研究中关键的一步
。
[0003]目前应用于拷贝数变异检测的技术主要有：比较基因组杂交技术
(comparative genome hybridization,CGH)、TaqMan
荧光探针技术
、
变性高效液相色谱
(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)
技术
、
多重连接探针扩增技术
(multiplex ligation
‑
dependent probe amplification,MLP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法，其特征在于，以
OsGluB5
基因
3'UTR OsGluB5Ter
为内源序列，在内源
3'UTR
的序列中插入长度大于
10bp
的
DNA
指纹序列，得到转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
；基于所述转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
的序列，在所述
DNA
指纹序列的两侧设计共用引物对；以转基因生物为待测样品；使用所述共用引物对，以待测样品的基因组
DNA
为模板，进行
qPCR
，得到
PCR
产物；分析所述
PCR
产物的熔解曲线，根据转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
序列熔解峰和内源
3'UTR OsGluB5Ter
序列熔解峰的荧光强度比值，判定转基因生物目的基因拷贝数；所述转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
序列熔解峰和内源
3'UTR OsGluB5Ter
序列熔解峰对应的温度差值
≥1.2℃。2.
根据权利要求1所述利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法，其特征在于，所述内源
3'UTR OsGluB5Ter
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示，和
/
或，所述
DNA
指纹序列如
SEQ ID NO.3
所示
。3.
根据权利要求1或2所述转利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法，其特征在于，所述转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。4.
根据权利要求1‑3任意一项所述利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法，其特征在于，转基因生物目的基因拷贝数＝
K
×
(
转基因终止子
OsGluB5Ter
‑
T
序列熔解峰荧光值
/
内源3′
UTR OsGluB5Ter
序列熔解峰荧光值
)
，
K
为常数
。5.
根据权利要求1‑4任意一项所述利用含指纹序列的终止子检测转基因拷贝数的方法，其特征在于，若样本的
OsGluB5Ter
‑
T
熔解峰缺失，仅存在
OsGluB5Ter
熔解峰，则该样本的
OsGluB5Ter
‑
T
目的基因拷贝数为0；若样本的
OsGluB5Ter
‑
T
熔解峰荧光值
/OsGluB5Ter
熔解峰荧光值在
0.25
‑
0.74
之间，则该样本的
OsGluB5Ter
‑
T
目的基因拷贝数为1；若样本的
OsGluB5Ter
‑
T
熔解峰荧光值
/OsGluB5Ter
熔解峰荧光值在
0.75
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵光苗，欧阳超，安保光，金雄霞，王健华，陈建南，
申请(专利权)人：海南波莲科技有限公司，
类型：发明
国别省市：