对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌制造技术

对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌

【技术实现步骤摘要】
对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌T79及其培养方法


[0001]本专利技术涉及多粘芽孢杆菌培养
，具体涉及对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法
。

技术介绍

[0002]多粘类芽孢杆菌
(Paenibacillus polymyxa)
是好氧芽孢杆菌，兼性厌氧，分解葡萄糖和其他糖类产酸，有时产气，在营养琼脂上无可溶性色素
。
多粘类芽孢杆菌在自然环境中栖息广泛，不仅常见于土壤
、
植物体表以及植物的根
、
低茎部位，而且是常见的植物内生细菌，自然界分离的多粘芽孢杆菌菌株多具有一定的生物活性，如抗生作用
、
溶菌作用
、
诱导抗性和促生作用等，有的还表现出抗病毒
、
抗肿瘤和支原体
、
抗真菌的生物活性，多粘芽孢杆菌可以在高渗
、
高酸
、
高碱
、
高温
、
高寒的环境下良好生长，有较大的生态学价值，因此在工业
、
医药
、
农业等领域中有广泛的应用价值，多粘类芽孢杆菌处理过的植物的田间试验表明，多粘类芽孢杆菌的活性包括固氮，溶解土壤中的磷，产生抗生素
、
激素
、
细胞分裂素
、
几丁质酶和水解酶，诱导植物的有关基因的表达，改善土壤结构
。
这些活性可能对促进植物的生长起重要作用
。
[0003]多粘芽孢杆菌
T79(Paenibacillus polymyxa T79)
，是在金银花根际土壤当中分离出来的，用
16S
和
gyrB
方法鉴定为多粘芽孢杆菌
。
经过平板对峙，发现多粘芽孢杆菌
T79
对金银花尖镰孢菌
、
链格孢
、
拟茎点霉
、
刺盘孢
、
粉红单端孢
、
番茄葡柄霉
、
青霉
、
曲霉这8种致病真菌具有拮抗活
。
经致病性鉴定，多粘芽孢杆菌杆菌
T79
对金银花和其它植物均没有致病性
。
[0004]在防效试验中，试验采用室外已经发病的金银花病株来对多粘芽孢杆菌
T79
菌株进行有效性检验，用自来水将振荡培养的菌悬液稀释后，用手动喷壶在金银花白粉病病株上喷雾，以不同位置的3株为一个处理，标记不同方向
27
片叶子白粉病病斑直径和
27
个新枝长度，求平均值
。
设清水对照，共7个处理
。
每天观察记录白粉病病斑的变化情况，连续观察1个月，新枝长度最后一次调查
。
经过试验对金银花的防病促生作用明显，对金银花白粉病的防治效果和促生作用如表1所示
。
[0005]表1菌液喷雾后的病斑变化情况单位：
(cm)
多粘芽孢杆菌
T79
菌液稀释
50
倍和
100
倍在
29
天时对金银花白粉病防治效果达到
100
％，在
400
倍时第
23
天开始有白粉病复发，病程进行的并不快
。
在
800
倍的防治效果就不太理想，在第8天以后病斑开始缓慢生长，防治效果不理想
。
在第
29
天对金银花新生小枝测量长度，发现金银花小枝的生长程度对菌液浓度有明显的依赖性，所以多粘芽孢杆菌
T79
菌液具有明显的促生作用
。
在进行此实验时，发现试验株金银花褐斑病发生很低，与对照有显著差距，但是因为不是试验主要标的，所以没有采集到完整数据
。
凡是喷过多粘芽孢杆菌
T79
菌液的菌株在短时间内，叶色变的鲜亮，活力增加
。
[0006]在用多粘芽孢杆菌
T79
菌液稀释
50
倍水培金银花
、
女贞
、
大叶黄杨木质化好的幼枝进行生根试验，并用清水对照，
45
天以后，金银花枝条活性增强并生根，平均长度有
2.33cm
，叶子上白粉病，但是自愈；清水对照组只有一个生根，而且叶子都上白粉病脱落
。
女贞和大叶黄杨只是长出了愈伤组织，和对照没有区别
。
说明多粘芽孢杆菌
T79
对金银花具有选择性
。
[0007]目前，传统农药和化肥的过量使用导致很多植物病虫产生抗药性，造成生态环境的恶性循环，而多粘类芽孢杆菌能分泌大量的活性物质，对许多细菌和真菌有抑制活性，能提高植物的抗病能力，促进植物生长，提高产量，并能产生多肽类抗菌物质对植物病原真菌有较好的拮抗活性
。
它是一种较好的生防细菌
。
另外，多粘芽孢杆菌还具有多种酶活
、
抗氧化和抗肿瘤等生物活性，当其多粘芽孢杆菌
T79
的培养仍较不成熟，无法很好的进行培养多粘芽孢杆菌
T79。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于针对现有技术中不足与缺陷，提供对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法
。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案是：对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，它包括以下具体步骤：菌种活化；菌液培养；专用培养基制备：专用培养基对多粘芽孢杆菌
T79
有超过
LB
培养基的营养供应能力，在相同培养条件下，专用培养基比多粘芽孢杆菌
T79
菌含量高6倍；菌液或母种生产
。
[0010]作为本专利技术更为具体的：所述菌种活化的具体操作为：在灭菌后的超净工作台上，用接种针将甘油管当中的贮存菌种挑出，采用划线法将原种接种在制作好的
LB
平板培养基上，在培养箱当中培养一段时间，所述在培养箱当中的培养时间为
48h。
[0011]作为本专利技术更为具体的：所述菌液培养的具体操作为：将平板培养基上的菌落用无菌生理盐水冲洗到盛有灭过菌的
LB
液体培养基的三角瓶当中，用封口膜封装好，接种量质量分数为
1/50
，在
37℃
的恒温摇床上，
200
转
/
分培养
48h。
[0012]作为本专利技术更为具体的：所述专用培养基制备包括液体培养基配方与固体培养基配方，所述液体培养基配方具体为：黄豆粉
25g
，玉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：它包括以下具体步骤：
1)
菌种活化；
2)
菌液培养；
3)
专用培养基制备：专用培养基对多粘芽孢杆菌
T79
有超过
LB
培养基的营养供应能力，在相同培养条件下，专用培养基比多粘芽孢杆菌
T79
菌含量高6倍；
4)
菌液或母种生产
。2.
根据权利要求1所述的对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：所述步骤1中菌种活化的具体操作为：在灭菌后的超净工作台上，用接种针将甘油管当中的贮存菌种挑出，采用划线法将原种接种在制作好的
LB
平板培养基上，在培养箱当中培养一段时间
。3.
根据权利要求2所述的对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：所述在培养箱当中的培养时间为
48h。4.
根据权利要求1所述的对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：所述步骤2中菌液培养的具体操作为：将平板培养基上的菌落用无菌生理盐水冲洗到盛有灭过菌的
LB
液体培养基的三角瓶当中，用封口膜封装好，接种量质量分数为
1/50。5.
根据权利要求4所述的对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：所述在封装好后，应在
37℃
的恒温摇床上，
200
转
/
分培养
48h。6.
根据权利要求1所述的对金银花有防病促生作用的多粘芽孢杆菌
T79
及其培养方法，其特征在于：所述步骤3的专用培养基制备包括液体培养基配方与固体培养基配方
。7.
根据权利要求6所述的对金银...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金库，冯争光，王桂英，刘金，卢建桥，刘晓东，刘小杰，黄娟英，孙超，
申请(专利权)人：廊坊市农林科学院，
类型：发明
国别省市：