一种共负载阴离子和疏水性免疫佐剂的纳米颗粒佐剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种共负载阴离子和疏水性免疫佐剂的纳米颗粒佐剂及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种共负载阴离子和疏水性免疫佐剂的纳米颗粒佐剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药
，更具体地，涉及采用可电离脂质共负载阴离子免疫佐剂和
/
或疏水性免疫佐剂形成的脂质纳米佐剂及制备方法，及其配合水痘
‑
带状疱疹病毒
(VZV)
相关蛋白
gE
为抗原的疫苗的应用
。

技术介绍

[0002]免疫佐剂也称为免疫激动剂，与抗原同时或者预先免疫机体可增强抗原的免疫原性和改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质
。
目前被批准用于人类疫苗的佐剂中，铝盐和
MF59
能够增强体液免疫和
Th2
免疫应答，但其不能诱导产生足够的细胞毒
T
淋巴细胞免疫应答
。
病毒样颗粒制作工艺复杂，成分不明确
。
肿瘤治疗性疫苗的研发急需结构明确，安全有效，易于生产的新型佐剂
。
[0003]近年来，一些新型细胞
Toll
样受体激动剂可产生强烈的细胞免疫应答，比如
TLR4
激动剂
MPLA
，
TLR9
激动剂
CpG
‑
ODN
，
TLR3
激动剂
Poly(I:C)
，
TLR7/8
激动剂
IMQ
等分子佐剂已被广泛用于预防和治疗性疫苗上
。
但由于此类佐剂分子量小，容易引起的全身炎症毒性，容易被快速代谢掉
。
通过生物材料将分子佐剂包裹形成纳米佐剂
(
通常小于
100nm)
，则可以通过靶向淋巴结或者通过抗原呈递细胞携带至引流淋巴结
。
纳米佐剂可以避免佐剂诱发的全身性毒性，通过靶向淋巴结可以在富含抗原呈递细胞
(APC)
的淋巴结中长时间滞留并持续激活免疫应答
。
而且由于包裹佐剂的生物材料可以大大提高佐剂在淋巴结中的密度，可以高效激活
TLR
通路；另外，由于不同分子佐剂的免疫特点不同，通常会使用两种或者多种分子佐剂共同使用；目前，唯一被临床批准使用的是
GSK
研发的
Shingrix
重组疫苗，其使用的
AS01
佐剂可以激发较强的体液免疫和细胞免疫应答
。AS01
负载的
MPLA
和
QS21
是通过疏水作用嵌插在脂质体囊泡中，该方式对一些具有较好佐剂效应的阴离子佐剂的负载具有局限性
。
而且，
AS01
纳米颗粒佐剂的制备时通过传统的膜水化法，其制备过程复杂，可控性较差
。
即使现有的一些阳离子脂质，如
DOTAP、DOTMA
等可同时负载阴离子分子佐剂和疏水小分子佐剂，但是其较强的正电荷对阴离子分子佐剂的束缚过强会导致佐剂释放效率低，佐剂效应降低；此外由永久性阳离子脂质颗粒由于其强的正电性会与体液中的血清蛋白结合导致被体液系统快速清除，使得药物半衰期缩短
。
而且，阳离子脂质组成的脂质体存在热力学不稳定等问题，大大限制了其应用
。
同时，此类阳离子佐剂的细胞毒性较大使得此类阳离子脂质不能应用在同时输送阴离子佐剂和疏水佐剂上
。
因此需要可负载不同功能的阴离子佐剂和疏水佐剂且负载效率和免疫效率更好的纳米颗粒佐剂系统
。

技术实现思路

[0004]在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义
。
并且，本文中所涉及的实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤
。
同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释
。
[0005]如本文中使用的，术语“可电离脂质”是指同时具有叔氨或者肿氨和疏水烷基链的亲水基团的类脂质分子，其
pKa
在
5.0
～
7.4
之间
。
[0006]如本文中使用的，术语“颗粒佐剂”是指负载了相应分子佐剂，并在尺寸范围内具有特定形状的几何体，以离散颗粒
、
丸粒
、
珠粒或团粒存在为特征的物质状态，而不管其大小
、
形状或形态如何
。
[0007]如本文中使用的，术语“纳米颗粒佐剂”是指在尺寸
(
即颗粒的最长维度中的直径
)
一个维度上小于
200
纳米的颗粒
。
[0008]如本文中使用的，术语“粒径”即“等效粒径”，是指当被测颗粒的某种物理特性或物理行为与某一直径的同质球体
(
或组合
)
最相近时，就把该球体的直径
(
或组合
)
作为被测颗粒的等效粒径
(
或粒度分布
)。
[0009]如本文中使用的，术语“平均粒径”是指对于一个由大小和形状不相同的粒子组成的实际粒子群，与一个由均一的球形粒子组成的假想粒子群相比，如果两者的粒径全长相同，则称此球形粒子的直径为实际粒子群的平均粒径
。
平均粒径的测量方法是本领域技术人员已知的，例如光散射法；平均粒径的测量仪器包括但不限于马尔文粒径仪
。
[0010]如本文中使用的，术语“室温”是指
25
±
5℃。
[0011]如本文中使用的，术语“免疫佐剂”是指同抗原一起或预先施用于机体内，能增强免疫原性或改变免疫反应类型的物质
。
免疫佐剂本身可以具有免疫原性
(
例如卡介苗
)
，或不具有免疫原性
(
例如氢氧化铝佐剂
)。
所述“阴离子免疫佐剂”，是指将在水中电离后带负电荷的免疫佐剂称为阴离子免疫佐剂；所述“疏水性免疫佐剂”是指不溶于水的，只能溶解在中性和非极性溶液
(
如有机溶剂
)
的免疫佐剂
。
[0012]如本文中使用的，术语“抗原”或“免疫原”是指能够诱导宿主体内的特异性免疫应答的物质
。
抗原可以包括整个生物体
(
例如灭活的
、
减毒的或活的生物体
)
；生物体的亚单位或部分；含有具有免疫原性的插入物的重组载体；在呈递给宿主后能够诱导免疫应答的
DNA
部分或片段；蛋白
、
糖蛋白
、
脂蛋白
、
多肽
、
肽
、
抗原表位
、
半抗原
、
毒素
、
抗毒素或其任何组合<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种纳米颗粒佐剂，其特征在于，包含可电离脂质
、
阴离子免疫佐剂和
/
或疏水性免疫佐剂及辅助脂质，所述辅助脂质包括中性辅助脂质
、
胆固醇和聚乙二醇化脂质
。2.
根据权利要求1所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述可电离脂质为酸解离常数
pKa
在
5.0
～
7.4
之间的脂质
。3.
根据权利要求2所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述可电离脂质选自4‑
(N,N
‑
二甲基氨基
)
丁酸
(
二亚油基
)
甲酯，1‑
辛基壬基8‑
[(2
‑
羟乙基
)[6
‑
O
‑6‑
(
十一烷氧基
)
己基
]
氨基
]
‑
辛酸酯，
((4
‑
羟基丁基
)
氮杂二烷基
)
双
(
己烷
‑
6,1
‑
二基
)
双
(2
‑
己基癸酸酯
)
，
(10Z)
‑
N
‑
[3
‑
(
二甲基氨基
)
丙基
]
‑
N
‑
[3
‑
乙基
‑1‑
(
十八烷基氨基
)
‑1‑
氧亚基庚
‑2‑
基
]
十八
‑9‑
烯酰
{R2
‑
1,N
‑
(3
‑
(dimethylamino)propyl)
‑
N
‑
(3
‑
ethyl
‑1‑
(octadecylamino)
‑1‑
oxoheptan
‑2‑
yl)oleamide}
，
(10Z,12Z)
‑
N
‑
[3
‑
(
二甲基氨基
)
丙基
]
‑
N
‑
[3
‑
乙基
‑1‑
(
十八烷基氨基
)
‑1‑
氧亚基庚
‑2‑
基
]
十八
‑
9,12
‑
二烯酰胺
{R2
‑
2,(9Z,12Z)
‑
N
‑
(3
‑
(dimethylamino)propyl)
‑
N
‑
(3
‑
ethyl
‑1‑
(octadecylamino)
‑1‑
oxoheptan
‑2‑
yl)octadeca
‑
9,12
‑
dienamide}
，
(10Z,12Z)
‑
N
‑
[3
‑
(
二甲基氨基
)
丙基
]
‑
N
‑
[3
‑
乙基
‑1‑
(
十八烷基氨基
)
‑1‑
氧亚基庚
‑2‑
基
]
十八
‑
9,12
‑
二烯酰胺
{R3
‑
1,N
‑
(3
‑
(diethylamino)propyl)
‑
N
‑
(3
‑
ethyl
‑1‑
(octadecylamino)
‑1‑
oxoheptan
‑2‑
yl)oleamide}
，
(10Z,12Z)
‑
N
‑
[3
‑
(
二乙基氨基
)
丙基
]
‑
N
‑
[3
‑
乙基
‑1‑
(
十八烷基氨基
)
‑1‑
氧亚基庚
‑2‑
基
]
十八
‑
9,12
‑
二烯酰胺
{R3
‑
2,(9Z,12Z)
‑
N
‑
(3
‑
(diethylamino)propyl)
‑
N
‑
(3
‑
ethyl
‑1‑
(octadecylamino)
‑1‑
oxoheptan
‑2‑
yl)octadeca
‑
9,12
‑
dienamide}
中的任意一种或多种
。4.
根据权利要求1所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述阴离子免疫佐剂选自天然免疫激动剂
、
植物来源佐剂或细胞因子类佐剂中的一种或多种
。5.
根据权利要求4所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述天然免疫激动剂为模式识别受体激动剂
。6.
根据权利要求5所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述模式识别受体激动剂选自
Toll
样受体激动剂
、
核苷酸结合寡聚化结构域
NOD
样受体激动剂
、
视黄酸诱导基因
I
样受体激动剂
、C
‑
型凝集素受体激动剂或胞内核酸感受器
STING
激动剂中的一种或多种
。7.
根据权利要求6所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述
Toll
样受体激动剂选自
CPG ODNs、ssRNA、23S rRNA、Pam2csk4、Pam3csk4、FLA、ssPoly(U)
或
poly(I:C)
中的一种或多种
。8.
根据权利要求6所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述核苷酸结合寡聚化结构域
NOD
样受体激动剂选自
C12
‑
iE
‑
DAP、C14
‑
Tri
‑
LAN
‑
Gly、iE
‑
DAP、Tri
‑
DAP、M
‑
TriDAP、Gram
‑
PGNs、MDP
或
Murabutide
中的一种或多种
。9.
根据权利要求6所述纳米颗粒佐剂，其特征在于，所述视黄酸诱导基因
I
样受体激动剂选自
3p
‑
hpRNA、5'ppp
‑
dsRNA、Poly(dA:dT)、poly(I:C)LyoVec
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鸿，陈永明，刘志佳，
申请(专利权)人：广州立得生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：