【技术实现步骤摘要】
一种细菌漆酶变构体及其制备方法
[0001]本专利技术涉及基因工程和酶工程领域,尤其涉及高表达量的细菌漆酶变构体及其制备方法
。
技术介绍
[0002]漆酶,一种含多个铜离子的多酚氧化酶,主要以单体糖蛋白的形式存在
。
漆酶有着广泛的催化底物谱,能够催化氧化酚类和芳香族化合物,发生反应后唯一的产物就是水,因此本质上是一种环保催化剂
。
此外,还能和其他酶协同催化,是最具有潜力的工业酶制剂
。
漆酶可以用于食品加工
、
纸浆漂白和绿色合成等工业领域,具有广阔的应用价值
。
在自然界中,漆酶的来源广泛,在真菌
、
细菌
、
植物和动物中都发现了漆酶,不同物种来源的漆酶功能相似
。
其中,细菌来源的漆酶相对于其他漆酶,具有生长周期短
、
热稳定性好且
pH
范围宽等优势,更适合大规模工业化应用
。
然而,目前有关提高细菌来源漆酶活性和表达量的方法甚少,因此,对提高细菌漆酶活性和表达量的研究具有重要研究意义和实际应用价值
。
定向改造策略是对蛋白质进行多轮积累
、
连续突变
、
表达
、
筛选,从而引导蛋白质的表达朝人们需要的方向进行的手段
。
它是目前应用最广泛的蛋白质改造手段,但其筛选时间长
、
工作量大
、
且突变随机不可预测,
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种细菌漆酶变构体,其特征在于:所述细菌漆酶变构体的氨基酸序列为
SEQ ID NO.6
所示序列
。2.
根据权利要求1所述的细菌漆酶变构体,其特征在于:所述的缺失片段为野生型细菌漆酶序列中形成
R
‑
loop
结构或
MR
螺旋的氨基酸序列
。3.
一种编码如权利要求1或2任一项所述的细菌漆酶变构体的核酸序列,其特征在于:所述的核酸序列为
SEQ ID NO.15
所示序列
。4.
一种工程菌,其特征在于:所述的工程菌中含有权利要求3中所述的核酸序列
。5.
一种工程菌,其特征在于:所述的工程菌中含有权利要求1‑2任一项所述的细菌漆酶变构体
。6.
一种如权利要求1‑2任一项所述的细菌漆酶变构体的制备方法,其特征在于包括以下步骤:步骤
1、
获取序列:以大肠杆菌来源的漆酶
CueO
的晶体结构为原型,通过
Autodock Vina、RosettaFold、PyMOL、Procheck
软件进行蛋白质辅助设计,得到细菌漆酶变构体
、
序列结构与基因序列;步骤
2、
合成漆酶基因:根据宿主菌株的密码...
【专利技术属性】
技术研发人员:兰善红,刘金环,胡俊杰,吕小梅,
申请(专利权)人:东莞理工学院,
类型:发明
国别省市:
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