多花黄精多糖寡糖片段及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了多花黄精多糖寡糖片段及其制备方法和应用，其制备方法包括：

【技术实现步骤摘要】
多花黄精多糖寡糖片段及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及植物多糖寡糖片段，尤其涉及多花黄精多糖寡糖片段及其制备方法，本专利技术进一步涉及所制备的多花黄精多糖寡糖片段在制备促进
GLP
‑1分泌的药物中的用途，属于植物多糖寡糖片段及其应用领域
。

技术介绍

[0002]多花黄精味甘性平，具有补气养阴，健脾润肺益肾的功效
。
多花黄精主要含有多糖
、
甾体皂苷
、
黄酮
、
苯丙素类
、
蒽醌类化合物
、
维生素和多种氨基酸等化合物
。
其中多糖是多花黄精中最主要的功效成分，为药典评判黄精质量的重要指标之一
。
黄精多糖具有多种良好的生物活性：增强免疫力
、
抗肿瘤
、
抗菌
、
抗衰老
、
抗病毒
、
降血糖
、
降血脂
、
改善动脉粥样硬化
、
抑制骨质疏松
、
抗抑郁症和保护心肌细胞等
。
研究表明多花黄精多糖可以通过促进肠上皮
L
细胞分泌
GLP
‑1发挥降血糖作用
。
然而多糖结构复杂，对其结构难以精确测定，限制了多花黄精多糖作用机制的深入研究
。
[0003]多糖的分子修饰是指利用化学
、
物理和生物等方法对多糖分子进行结构改造，主要包括改变多糖的分子质量，取代基的种类
、
数目和位置以及空间构象等，进而影响多糖的生物学活性
。
目前，国内外学者提出的多糖结构修饰方法主要分为化学修饰
、
物理修饰和生物修饰
。
但化学修饰及物理修饰多需要使用化学试剂及较为严苛的反应环境，容易造成对环境的污染，资源浪费等情况
。
而生物修饰多采用专一性酶进行，具有专一性强
、
绿色环保
、
条件温和
、
无毒副反应等诸多优点
。
研究发现多花黄精多糖主要由果糖和葡萄糖以
28:1
的比例组成，其结构特征为主链由
β
‑
D
‑
果糖组成
。
现有的多花黄精多糖对于
GLP
‑1的促分泌活性较差，有待改进
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供具有促进
GLP
‑1分泌活性的多花黄精多糖寡糖片段及其制备方法；
[0005]本专利技术的目的之二是将本专利技术提供的多花黄精多糖寡糖片段应用于制备促进
GLP
‑1分泌的药物或制备降血糖药物中的用途；
[0006]为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案包括：
[0007]本专利技术的一方面是提供了一种多花黄精多糖寡糖片段，其制备方法包括：
(1)
将多花黄精多糖
(PCP)
溶解于酶解反应的缓冲溶液中；
(2)
加入果糖苷酶进行酶解反应；
(3)
终止反应后，将反应液离心
、
透析
、
纯化
、
冷冻干燥即得
。
[0008]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(1)
中所述的缓冲溶液优选为柠檬酸
‑
磷酸氢二钠缓冲溶液；进一步优选的，将多花黄精多糖溶解于柠檬酸
‑
磷酸氢二钠缓冲溶液中至其终浓度为
0.67mg/mL。
[0009]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(2)
中果糖苷酶的加入量为
30
～
150U/mL
；在反应开始的
0.5h
～
2h
内，各反应体系中还原糖的含量迅速增加且随着时间的延长，体
系中还原糖含量逐渐升高；而在反应开始后的
2h
～
12h
内，各反应体系中还原糖的含量维持相对稳定，无明显上升趋势
。
由图可知，当加酶量为
120U/mL
时，反应体系中还原糖的含量最多，而当加酶量提高至
150U/mL
时，体系中的还原糖含量降低
。
推测是由于过量的果糖苷酶的存在抑制了酶活性，从而导致反应体系中还原糖含量下降
。
因此，本专利技术酶解反应中果糖苷酶降解
PCP
的最适酶浓度为
120U/mL。
[0010]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(2)
中酶解反应的反应体系的
pH
值为2～6；
pH
是影响酶活性的重要因素之一，在酶解反应发生的
2h
内，各体系中还原糖的含量逐渐升高
。
当反应时间固定为
12h
时，
pH3
的反应体系中还原糖含量最高，为
0.493mg/mL。pH 2
的还原糖含量最低，为
0.293mg/mL。
而
pH 4、pH 5、pH 6
的还原糖含量均低于
pH 3
，高于
pH 2。
说明
pH 3
最适于果糖苷酶降解
PCP
，因此，酶解反应的反应体系的
pH
值最优选为
3。
[0011]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(2)
中酶解反应的温度为
30
～
70℃
；酶解反应的进行受温度的影响较大
。
温度升高可以促进酶解反应的进行，提高酶解速率；而过高的温度则会使酶失活变性，从而使酶解速率降低
。
由图3可知，反应温度为
30℃
和
70℃
时，反应体系中还原糖含量较低，说明在较低温或较高温的环境下果糖苷酶无法较好发挥降解作用；而当反应温度为
60℃
时，反应体系中还原糖的含量最高，说明
60℃
是果糖苷酶发挥降解作用的适宜温度；因此，本专利技术的酶解反应的温度最优选为
60℃。
[0012]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(2)
中酶解反应的时间为
0.5h
‑
12h
，优选的，酶解反应的时间为
4h。
[0013]本专利技术的一种优选的具体实施方式，步骤
(3)
中所述的离心优选转速为
5000g,
离心时间优选为
10min
；所述的透析优选采用截留分子量大于
500Da
的透析袋先用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，其制备方法包括：
(1)
将多花黄精多糖溶解于酶解反应的缓冲溶液中；
(2)
加入果糖苷酶进行酶解反应；
(3)
终止反应后，将反应液离心
、
透析
、
纯化
、
冷冻干燥即得
。2.
根据权利要求1所述的多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，步骤
(1)
中所述的缓冲溶液为柠檬酸
‑
磷酸氢二钠缓冲溶液；优选的，将多花黄精多糖溶解于柠檬酸
‑
磷酸氢二钠缓冲溶液中至其终浓度为
0.67mg/mL。3.
根据权利要求1所述的多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，步骤
(2)
中果糖苷酶的加入量为
30
～
150U/mL
；优选的，步骤
(2)
中果糖苷酶的加入量为
120U/mL。4.
根据权利要求1所述的多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，步骤
(2)
中酶解反应的温度为
30
～
70℃
；优选的，步骤
(2)
中酶解反应的温度为
60℃。5.
根据权利要求1所述的多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，步骤
(2)
中酶解反应的时间为
0.5h
‑
12h
，优选的，步骤
(2)
中酶解反应的时间为
4h。6.
根据权利要求1所述的多花黄精多糖寡糖片段，其特征在于，步骤
(3)
中所述的透析采用截留分子量大于
500Da
的透...

【专利技术属性】
技术研发人员：解松子，吴德玲，张王娟，刘春阳，史进阳，秦亚敏，陈仕云，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：