五甲基四氢叶酸的核酸适配体及其在畜产品检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体及其在畜产品检测中的应用

【技术实现步骤摘要】
五甲基四氢叶酸的核酸适配体及其在畜产品检测中的应用


[0001]本专利技术涉及核酸适配体，尤其涉及识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体
、
含有该核酸适配体的传感器
、
检测探针或检测试剂盒及其在检测畜产品五甲基四氢叶酸中的应用，属于核酸适配体及畜产品检测领域
。

技术介绍

[0002]五甲基四氢叶酸（5‑
mTHF
）是叶酸的生物活性形式
。
叶酸又称为维生素
B9
，一种与人体健康息息相关的微量营养物质，叶酸缺乏会导致多种疾病，对孕妇尤其重要
。
而人体内不能直接合成叶酸，需要从饮食中获得
。
叶酸进入生物体后经过酶促反应生成五甲基四氢叶酸后进一步参加机体反应，全球有近乎
25%
的人群存在亚甲基四氢叶酸还原酶基因多变性，因此这部分人群只补充叶酸是无法被身体利用的，需要直接补充五甲基四氢叶酸
。
[0003]目前，检测叶酸及其活性形态的主要检测方法是采用高效液相质谱（
HPLC
‑
MS
）法，联用技术基于高效液相质谱法检测，但是其成本高，操作复杂，很大程度限制了其食品行业的广泛应用
。
市场上销售的快速检测试剂盒，多针对叶酸受体，几乎未见叶酸或者五甲基四氢叶酸直接检测试剂盒
。
鉴于目前五甲基四氢叶酸检测难度大
、
成本高等问题，因此，发展一种新型识别分子，对食品中五甲基四氢叶酸含量测定具有重大意义，可进一步开发五甲基四氢叶酸快速检测方法，如试剂盒等
。
[0004]核酸适配体（
Aptamer
）是一种新型识别分子，近几年来得到广泛关注
。
核酸适配体能通过折叠成二级或三级结构，与靶标分子以氢键作用和形状匹配等作用方式高效结合，靶标包括，小分子
、
抗生素
、
蛋白
、
金属离子等
。
具有亲和力高，特异性好，易合成等优点，是一种理想的识别分子，可广泛应用于分析检测领域
。
迄今为止，未见有特异性识别五甲基四氢叶酸核酸适配体的研究报道
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一是提供识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体；本专利技术的目的之二是提供含有所述识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体的传感器
、
检测探针或试剂盒；本专利技术的目的之三将所述的识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体应用于检测样品中的五甲基四氢叶酸
。
[0006]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术的一方面是提供识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体，所述的核酸适配体选自以下
(a)
‑
(d)
所述的任何一种核苷酸序列：
(a)SEQ ID No.1
所示的多核苷酸序列；或
(b)
与
SEQ ID No.1
的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸序列，该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸；或
(c)
由
SEQ ID No.1
所示的多核苷酸序列转录的
RNA
序列；
或
(d)
与
SEQ ID No.1
的多核苷酸序列至少有
60%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸；优选的，与
SEQID No.1
的多核苷酸序列至少有
80%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸；更优选的，与
SEQ ID No.1
的多核苷酸序列至少有
90%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸
。
[0007]本专利技术的一种优选的具体实施方案，所述核酸适配体序列可被修饰，所述修饰包括磷酸化
、
甲基化
、
氨基化
、
羧基化
、
巯基化或同位素化修饰；或者，所述核酸适配体的序列的5’
端或3’
端连接荧光标记物
、
放射性物质
、
生物素
、
链霉亲和素
、
地高辛
、
纳米发光材料或酶
。
[0008]本专利技术的另一方面是提供一种检测五甲基四氢叶酸的核酸适配体传感器，该核酸适配体传感器包括
PCR
引物，特异结合五甲基四氢叶酸的核酸适配体；其中，所述的特异结合五甲基四氢叶酸的核酸适配体是本专利技术所筛选得到的核酸适配体，在所述的核酸适配体的5’
端或3’
端修饰荧光标记物
、
放射性物质
、
生物素
、
链霉亲和素
、
地高辛
、
纳米发光材料或酶
。
[0009]本专利技术的再一方面是一种检测五甲基四氢叶酸的试剂盒，该试剂盒包括：
PCR
管修饰溶液，
PCR
体系溶液，本专利技术所提供的特异结合五甲基四氢叶酸的核酸适配体
。
[0010]所述的
PCR
体系溶液，可以为商购
DNA
聚合酶时所带的反应液，也可以为根据反应原理配制而成的反应液，其中包括以下组分：
SYBR Green
染料，
Taq DNA 聚合酶，
PCR
缓冲液，
dNTP
，水
。
[0011] 本专利技术利用指数级富集配体的系统进化技术
(SELEX)
，以磁珠为分离介质，五甲基四氢叶酸（5‑
mTHF
）为靶标，通过9轮筛选获得与靶标特异结合的适配体，亲和力极高，解离常数达到
μ
M,
，特异性结合5‑
mTHF
小分子；本专利技术所筛选获得的核酸适配体具有良好的亲和力和特异性，可人工合成，成本低
、
生产周期短，易于化学修饰，可将该适配体制备成传感器
、
分子探针
、
检测试剂等用于食品中5‑
mTHF
小分子的检测
。
[0012]本专利技术所涉及到的术语定义除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义
。
虽然在本专利技术的实践或测试中可使用与本文所述者类似或等效的任何方法
、
装置和材料，但现在描述优选方法
、
装置和材料
。
[0013]术语“同源性”，指与天然核酸序列的序列相似性
。“同源性”包括与本专利技术的调控片段的核苷酸序列具有优选地
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
识别五甲基四氢叶酸的核酸适配体，其特征在于，所述的核酸适配体选自以下
(a)
‑
(d)
所述的任何一种核苷酸序列：
(a)SEQ ID No.1
所示的多核苷酸序列；或
(b)
与
SEQ ID No.1
的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸序列，该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸；或
(c)
由
SEQ ID No.1
所示的多核苷酸序列转录的
RNA
序列；或
(d)
与
SEQ ID No.1
的多核苷酸序列至少有
60%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸
。2.
根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述的核酸适配体与
SEQ ID No.1
的多核苷酸序列至少有
80%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸
。3.
根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述的核酸适配体与
SEQ ID No.1
的多核苷酸序列至少有
90%
以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸序列仍能特异性结合五甲基四氢叶酸
。4.
根据权利要求1‑3任何一项所述的核酸适配体，其特征在于，将所述核酸适配体序列进行修饰，所述修饰包括磷酸化
、
甲基化
、
氨基化
、
羧基化
、
巯基化或同位素化修饰；或者所述的修饰是将所述核酸适配体的序列的5’
端或3’
端连接荧光标记物
、
放射性物质
、
生物素
、
链霉亲和素
、...

【专利技术属性】
技术研发人员：余雅男，张军民，秦玉昌，汤超华，赵青余，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：