一种特异性识别制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性识别

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别AD7C
‑
NTP的核酸适配体及单分子免疫检测方法


[0001]本专利技术涉及一种特异性识别
AD7C
‑
NTP
的核酸适配体及单分子免疫检测方法，属于生物检测

。

技术介绍

[0002][0003]阿尔茨海默症相关神经丝蛋白
(AD
‑
associated neuronalthread protein
，
AD7C
‑
NTP)
是一种安全
、
有效的生物标记物，在
AD
诊断有着重要意义，具有广阔的应用前景
。AD7C
‑
NTP
隶属于神经丝蛋白家族，是一种相对分子质量为
41 000
的跨膜磷蛋白
。AD7C
‑
NTP
自神经元胞体中表达后，广泛存在于神经细胞发生的轴突中，并大量出现在
AD
患者脑中的
NFTs
里，呈分泌性上调表达
。
研究表明，
AD7C
‑
NTP
在神经元中的沉积在神经元变性早期即可出现，并且发生在
NFTs
形成之前，在早期
AD
患者的脑组织抽提物
、
脑脊液
、
尿液中均可以检测到
AD7C
‑
NTP。
同时
AD7C
‑
>NTP
含量水平随病程延长和痴呆严重程度呈正相关逐渐增高，这可能是由于
AD
患者脑组织
NTP
免疫活性及信使
RNA
表达增强，导致神经元细胞凋亡增多，继而使死亡细胞释放大量的
AD7C
‑
NTP。
神经元胞体和神经突触的丢失
、
神经元结构蛋白功能受损等病理过程，可以使
AD7C
‑
NTP
表达升高
。
而现有的
AD7C
‑
NTP
检测方法，灵敏度不高
(
酶联免疫技术，免疫层析技术，检测下限
mg/ml)
，特异性不好
(
双抗体夹心测抗原，配对的特异性抗体不容易获取
)
，给
AD7C
‑
NTP
试剂的实际应用与推广带来门槛阻碍
。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供的阿尔茨海默症相关神经丝蛋白适配体序列具有理想的亲和力
、
良好的特异性，基于其构建的检测方法能够更灵敏地检测分离出样本中存在的阿尔茨海默症相关神经丝蛋白
。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种特异性识别阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体的序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0006]进一步地，所述核酸适配体的5′
端或3′
端修饰有功能基团或分子
。
[0007]进一步地，所述功能基团或分子选自同位素
、
电化学标记物
、
酶标记物
、
荧光基团
、
生物素
、
亲和配基
、
巯基
、
氨基中的至少一种
。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供上述核酸适配体在制备阿尔茨海默症相关神经丝蛋白检测产品中的应用，包括但不限于试剂盒
、
试纸等
。
[0009]本专利技术的第三个目的是提供上述核酸适配体在制备阿尔茨海默症检测产品中的应用
。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供一种用于检测阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的产品，该产品中包括上述核酸适配体
。
[0011]进一步地，所述用于检测阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的产品中还包括：标记有
阿尔茨海默病相关神经丝蛋白抗体的磁性分离介质
、
核酸适配体
、
半乳糖苷酶
、
半乳糖苷酶底物，其中，核酸适配体可与半乳糖苷酶共价连接
。
[0012]进一步地，所述核酸适配体经生物素修饰，所述半乳糖苷酶经链霉亲和素修饰
。
[0013]本专利技术建立的单分子免疫检测方法，检测原理为：将特异性的捕获抗体包被于免疫磁珠上，样本中蛋白质抗原与抗体发生免疫反应，被捕获在磁珠上；加入生物素化的特异性适配体
APT
，与磁珠上的抗原结合，形成磁珠
‑
抗体
‑
抗原
‑
APT
‑
生物素；加入标记有链霉亲和素的
β
‑
半乳糖苷酶，与磁珠上的生物素结合，形成复合物：磁珠
‑
抗体
‑
抗原
‑
生物素
‑
链霉亲和素的
β
‑
半乳糖苷酶
。
将磁珠复合物转导于
SiMoA
微孔盘上的每个微孔内，并重悬在试卤灵
‑
β
‑
半乳糖苷的底物中，有
β
‑
半乳糖苷酶的磁珠微球产生荧光，检测器检测荧光信号强度
。
计数有荧光的孔数即可得到蛋白质抗原的数量通过与标准曲线对比即可得到样品中蛋白质抗原的含量
。
如果样品中没有蛋白抗原，磁珠上就不会结合有
B
‑
半乳糖苷酶，也就没有荧光产生
。
[0014]进一步地，所述用于检测阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的产品中还包括阿尔茨海默病相关神经丝蛋白标准液
。
[0015]进一步地，检测阿尔茨海默症相关神经丝蛋白包括以下步骤：
[0016]S1、
将已知浓度的阿尔茨海默症相关神经丝蛋白溶液与标记有阿尔茨海默病相关神经丝蛋白抗体的磁性分离介质共孵育，反应结束后洗涤去除未结合物质；
[0017]S2、
将
S1
的反应产物与生物素修饰的核酸适配体共孵育，反应结束后洗涤，去除非特异性结合；
[0018]S3、
将
S2
的反应产物与链霉亲和素修饰的半乳糖苷酶继续孵育，反应结束后洗涤，去除未结合物质；
[0019]S4、
向
S3
的反应产物中加入半乳糖苷酶底物进行反应，反应结束后检测荧光强度；
[0020]S5、
建立阿尔茨海默症相关神经丝蛋白浓度与荧光强度的关系曲线；
[0021]S6、
将已知浓度的阿尔茨海默症相关神经丝蛋白溶液替换为待检测样本重复步骤
S1
～
S4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种特异性识别阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列如
SEQ ID NO.1
所示
。2.
根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的5′
端或3′
端修饰有功能基团或分子
。3.
根据权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，所述功能基团或分子选自同位素
、
电化学标记物
、
酶标记物
、
荧光基团
、
生物素
、
亲和配基
、
巯基
、
氨基中的至少一种
。4.
权利要求1‑3任一项所述的核酸适配体在制备阿尔茨海默症相关神经丝蛋白检测产品中的应用
。5.
权利要求1‑3任一项所述的核酸适配体在制备阿尔茨海默症检测产品中的应用
。6.
一种用于检测阿尔茨海默症相关神经丝蛋白的产品，其特征在于，含有权利要求1‑3任一项所述的核酸适配体
。7.
根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述产品中含有：标记有阿尔茨海默病相关神经丝蛋白抗体的磁性分离介质
、
核酸适配体
、
半乳糖苷酶
、
半乳糖苷酶底物，其中，核酸适配体可与半乳糖苷酶共价连接

【专利技术属性】
技术研发人员：周衍，范俊，韩婷婷，施龙顺，李文新，周彬，郭明明，杨润琳，张珏，张艺，
申请(专利权)人：无锡市江原实业技贸有限公司，
类型：发明
国别省市：